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补肾活血法促进骨折愈合已经被大量的临床和实验研究证实,但疗效机理不明。尤其是中药如何调控成骨细胞生长、增殖;中药是刺激何种细胞因子以促进骨形成的作用机制方面有待进一步研究。为了深入探讨中药补肾活血法促进骨折愈合的机理,我们进了以下三部分的实验研究。第一部分 补肾活血方对实验性骨折愈合过程中IGF-Ⅰ的影响目的:观察补肾活血方对实验性骨折愈合过程中血清IGF-Ⅰ的影响。方法:选择7月龄SD大鼠,随机分为实验组和对照组,每组各12只。手术方法建立股骨骨折实验模型后,实验组动物每次给服补肾活血方药液20g·kg-1,连续28天。对照组给服等容量生理盐水。分别于药后2、4周检测血清IGF-Ⅰ浓度,并进行组织学、放射学、骨痂组织骨密度(BMD)测定及骨痂组织力学强度测试。结果:实验组血清IGF-Ⅰ浓度2、4周时明显高于对照组(P<0.05和P<0.01);骨痂组织骨密度及力学强度测试在4周时明显高于对照组(P<0.05),放射学、组织学显示实验组骨折愈合明显优于对照组。结论:补肾活血法能显著加速骨折愈合,其促进骨折愈合的作用部分是通过提高IGF-Ⅰ产生而介导的。第二部分 补肾活血方对离体胎鼠颅骨成骨细胞增殖的影响目的:探讨补肾活血法对成骨细胞代谢的影响。方法:胎鼠颅骨成骨细胞培养于含有不同浓度的补肾活血方药液培养基中72小时后,分别采用噻唑篮比色法和胸腺嘧啶核苷渗入法检测成骨细胞增殖、分化情况,并与具有促进细胞增殖作用的成纤维细胞生长因子对照。结果:补肾活血方药液呈剂量依赖方式促进成骨细胞增殖。结论:补肾活血方具有促进骨形成作用。第三部分 补肾活血方对成骨细胞生长因子TGF-β1 mRNA表达的影响目的:探讨补肾活血方对成骨细胞转化生长因子-β1(TGF-β1) mRNA表达 一4一 一 的影响。方法:将体外分离培养的新生SD大鼠的颅骨成骨细胞,用不同浓 度的补肾活血方药液Q~10000pg·ml“)进行处理。24 /J\时后,利用 制备的地高辛标记的鼠 TGF卢 CDNA探针进行成骨细胞的核酸原位分子 杂交分析,以其细胞内杂交阳性颗粒的平均光密度值代表TGFPlmRNA 的表达。结果:随着补肾活血方药液浓度的增加,成骨细胞内TGF七 mRNA表达明显高于对照组。结论:补肾活血方可刺激成骨细胞TGF凡 mRNA的分泌和合成,有利于新骨生长。*