量子点是荧光分析中常用荧光材料,与其它传统荧光试剂相比,量子点具有荧光发射光谱窄、激发光谱宽、发射光谱可调、抗光漂能力强、表面易修饰等特点。由于其优良的光学和化学性能,量子点被广泛应用于生化分析检测中。蛋白质类疾病标志物是由于人体病变导致代谢紊乱,而在体液中出现的浓度异常的物质(如酶、抗原、抗体等),其浓度可作为疾病诊断和治疗的重要指示物。目前,基于量子点免疫吸附荧光检测蛋白质,因其高灵敏度、高特异性而备受关注。但这些方法仍存在一些问题,如:预处理复杂、需要分离游离标记物、成本高等。因此,发展灵敏、低成本、简单的蛋白质检测新方法具有重要意义。为了降低检测背景,提高检测特异性和灵敏度,本论文基于量子点荧光猝灭-恢复模式,结合酶水解反应、抗原-抗体免疫反应及适配体-靶分子结合,建立了三种均相检测蛋白质的新方法,主要研究内容如下:(1)参考已有方法,制备了不同发射波长的量子点,比较了细胞色素C和鱼精蛋白对量子点的猝灭效果。结果显示,这两种蛋白均能有效猝灭量子点的荧光,且对小粒径量子点猝灭效应较强。然后,分别利用细胞色素C、鱼精蛋白作为量子点荧光猝灭剂和蛋白酶的水解底物,与量子点构建了荧光探针。研究发现,与细胞色素C相比,鱼精蛋白被胰蛋白酶催化水解速度较快,且水解产物较稳定。利用鱼精蛋白猝灭量子点荧光,而鱼精蛋白水解后量子点荧光恢复,且荧光恢复强度与胰蛋白酶浓度呈线性关系,实现了胰蛋白酶灵敏检测,该方法材料易得、无需标记且操作简单。(2)制备铜螯合物标记抗体(Cu-Ab)作为猝灭量子点荧光的QTL(quenchertether-ligand)探针,提出了一种基于量子点荧光猝灭-恢复均相检测甲胎蛋白的新方法。铜螯合物标记抗体不仅能与量子点生成基态络合物,猝灭量子点的荧光,同时也能与甲胎蛋白特异性结合。当体系中存在甲胎蛋白时,铜螯合物标记抗体与甲胎蛋白发生免疫反应,抗原-抗体高亲和力结合,使标记抗体离开量子点表面,从而导致量子点荧光恢复。此外,与商业化的钌配合物标记抗体相比(RuAb),铜螯合物标记抗体具有更低的制备成本和更高的猝灭效率。此研究扩展了基于金属螯合物与量子点相互作用在蛋白质检测中的应用。(3)参照上一章的方法,引入适配体作为识别靶分子的配体,通过铜螯合物标记链霉亲和素(Cu-SA)结合生物素化适配体(Biotin-APT),制备了一种低成本、稳定的QTL(quencher-tether-ligand)复合物。该复合物不仅能猝灭量子点荧光,还能与凝血酶特异性结合。不存在凝血酶时,量子点荧光被QTL复合物猝灭;当存在凝血酶时,凝血酶与QTL复合物特异性结合,体系荧光较强。根据体系荧光强度与凝血酶浓度之间的关系,实现了凝血酶的快速和特异性检测。