酶解乳铁蛋白制取乳铁素的工艺方法研究

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本文主要研究了利用乳铁蛋白水解产生乳铁素并进一步提取纯化的方法,对酶解条件进行了优化,并建立了数学模型,对今后的工业化生产具有一定的指导意义,研究成果主要包括:1.试验室规模离子交换色谱分离纯化乳铁素的优化条件为:HiTrap Q HP柱(1mL)、缓冲液A为20mM甘氨酸-NaOH,pH10.8:缓冲液B为20mM甘氨酸-NaOH,1.0M NaCl,pH10.8;洗脱梯度为20分钟A液从25%增到75%、柱温25℃、流速1mL/min。2.采用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶等五种蛋白酶,分别进行水解乳铁蛋白提取乳铁素的试验,试验结果表明,胃蛋白酶的水解效率远远高于其他蛋白酶,且产生的可见杂质少,过膜效率高。在反应温度为37℃、底物浓度5g乳铁蛋白/100mL水、酶用量1500u/g、pH2、反应时间120min的试验条件下,乳铁素得率为1.38%。3.通过单因素试验初步得出胃蛋白酶水解体系每个因素较理想点的组合:酶解时间60min、底物浓度3g/100mL、温度37℃、酶用量1000u/g、pH2.5。4.通过正交试验获得以得率为目标的优化工艺条件:底物浓度2g/100mL、酶用量1250u/g、反应时间75min,反应pH2.3,乳铁素得率为1.72%。5.通过正交试验获得以纯度为目标的优化工艺条件:底物浓度4g/100mL、酶用量750u/g、反应时间75min,反应pH2.5;乳铁素粗制品纯度为43.50%。6.对酶解条件进行二次旋转正交组合回归分析,得到回归方程为:Y=1.63-0.04X1+0.09X3+0.14X4-0.044X12-0.04X1X3-0.08X1X4-0.13X22-0.29X2X3+0.10X32-0.15X3X4-0.05X42。得出的优化工艺条件为:底物浓度1.1591g/100mL,酶用量829.55u/g,反应时间87.61min,pH2.87,在此条件下乳铁素的得率的理论值为2.48%。
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