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目的:通过检测2,3,7,8-四氯二苯并-对-二噁英(tetrachlorodibenzo-p-dioxinTCDD)在体外对乳腺癌MCF-7细胞活力、端粒酶活性、细胞周期及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平和细胞内游离钙离子浓度的影响,为进一步探讨其毒作用及其机制提供参考依据。
方法:常规培养乳腺癌MCF-7细胞。(1)在培养液中分别加入浓度为0,0.03,0.0625,0.125,0.25,0.5,1.0μmol·L-1的2,3,7,8-TCDD作用于MCF-7细胞24h,用噻唑蓝(MIT)法测定MCF-7的细胞活力。(2)用0.5μmol·L-1的2,3,7,8-TCDD作用于MCF-7细胞24,48,72h,裂解MCF-7细胞,采用BCA方法定量蛋白,端粒酶重复序列扩增-银染法检测端粒酶活性。(3)以0.05μmol·L-1的2,3,7,8-TCDD作用MCF-7细胞24,48,72h,流式细胞术(FCM)检测MCF-7细胞周期;SP免疫组化法检测MCF-7细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。(4)负载钙离子荧光剂Fluo-3/AM,在激光共聚焦显微镜下观察细胞内钙离子的浓度变化。
结论:(1)2,3,7,8-TCDD对MCF-7细胞毒性作用存在浓度依赖性,随浓度增大,细胞存活率明显降低;同一浓度下随着作用时间延长对细胞抑制率降低。(2)正常培养的乳腺癌MCF-7细胞的端粒酶活性呈阳性表达,经2,3,7,8-TCDD作用后,端粒酶活性增强,但随作用时间延长而降低。 (3)2,3,7,8-TCDD使MCF-7细胞阻滞于G0/G1期,并抑制Cyclin D1的表达。(4)2,3,7,8-TCDD使MCF-7细胞内钙离子浓度升高,但随着作用时间延长细胞内钙离子浓度降低。