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【目的】 研究黄芩汤对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障功能及Th9/IL-9信号的保护和干预作用,揭示中药复方黄芩汤治疗溃疡性结肠炎的药效机制。 【方法】 1.采用浓度为3.5%的DSS诱导小鼠急性溃疡性结肠炎模型,观察小鼠的一般状况,并对小鼠进行疾病活动度评分。 2.造模成功后,除正常组和模型组外,分别用黄芩汤和美沙拉嗪进行干预,对各组小鼠结肠组织HE染色并进行组织病理学评分;TUNEL染色法检测结肠上皮细胞的凋亡免疫组化法检测结肠组织中Caspase-3和闭合蛋白Occludin的表达;流式细胞术检测各组小鼠外周血中Th9细胞占CD4+T细胞的比例;ELISA法检测小鼠血清中细胞因子IL-9和IL-33的含量;Western blot法检测各组小鼠结肠组织中Occludin和IRF-4蛋白的表达。 【结果】 1.和正常对照组比较,其余三组小鼠均出现黏液性腹泻、脓血便、厌食、懒动、拱背、掉毛及体重减轻(P<0.01)等症状,模型组小鼠DAI评分显著增高(P<0.01),结肠长度明显缩短(P<0.01),脾重明显增高(P<0.01)。与模型组相比,黄芩汤组和美沙拉嗪组小鼠的DAI评分降低(P<0.01),结肠长度较长(P<0.05),脾重降低(P<0.05)。 2. HE染色结果显示:黄芩汤组及美沙拉嗪组的病理评分均较模型组显著降低(P<0.01)。 3. Tunel染色法结果显示:正常组少见上皮细胞凋亡,和正常组相比,模型组可见大量上皮细胞凋亡(P<0.01);和模型组相比较,黄芩汤组和美沙拉嗪组的结肠上皮细胞凋亡指数较低(P<0.01)。 4.结肠组织免疫组化结果显示:正常组促凋亡蛋白Caspase-3表达水平较低,模型组明显增高,黄芩汤组和美沙拉嗪组的表达水平较模型组明显降低(P<0.01);模型组Occludin蛋白的表达水平较其余三组也明显降低(P<0.01)。 5.流式结果显示:与正常组相比,模型组外周血中Th9细胞占CD4+T细胞的比例明显升高(P<0.05),和模型组相比较,黄芩汤组和美沙拉嗪组外周血中Th9细胞占CD4+T细胞的比例较低(P<0.05)。 6. ELISA结果显示:模型组小鼠血清中IL-9、IL-33含量较正常组明显升高(P<0.01);与模型组相比,黄芩汤组和美沙拉嗪组小鼠血清中IL-9、IL-33含量降低(P<0.05)。 7. Western blot结果显示:模型组中紧密连接蛋白Occludin的蛋白表达水平较正常组均明显降低(P<0.01),IRF-4的表达较正常组明显升高(P<0.01);和模型组相比,黄芩汤组和美沙拉嗪组中紧密连接蛋白Occludin的表达水平升高(P<0.01),IRF-4的表达水平降低(P<0.01)。 【结论】 1.进一步验证采用自由饮用7天浓度为3.5%的DSS能够成功构建C57BL/6小鼠急性溃疡性结肠炎模型。 2.黄芩汤可以有效缓解UC小鼠急性期的症状,降低其DAI评分和病理学评分。 3.黄芩汤可以保护肠黏膜屏障,机制可能与抑制肠上皮细胞凋亡,调节肠粘膜免疫,促进结肠组织中紧密连接蛋白的表达水平有关。 4.黄芩汤可以干预Th9/IL-9信号,机制可能与降低外周血中Th9细胞比例,降低血清中IL-9和IL-33的含量,并抑制结肠组织中Th9细胞特异性转录因子IRF4的表达有关。