【摘 要】
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菊苣（Cichorium intybus L.）是提取菊粉的主要原料和研究菊粉代谢的模式植物。菊苣产生的菊粉对人体健康有益,已被广泛用于食品工业。在生产和育种中,栽培菊苣的两个主要目标是保持田间种植菊苣中菊粉的含量和质量。前期研究发现,在收获季节晚期,低温引起果聚糖1-外切水解酶（Fructan 1-exohydrolase,1-FEH）的表达,从而导致菊苣主根中菊粉的降解。尽管1-FEH三种亚型
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菊苣（Cichorium intybus L.）是提取菊粉的主要原料和研究菊粉代谢的模式植物。菊苣产生的菊粉对人体健康有益,已被广泛用于食品工业。在生产和育种中,栽培菊苣的两个主要目标是保持田间种植菊苣中菊粉的含量和质量。前期研究发现,在收获季节晚期,低温引起果聚糖1-外切水解酶（Fructan 1-exohydrolase,1-FEH）的表达,从而导致菊苣主根中菊粉的降解。尽管1-FEH三种亚型（1-FEH1,1-FEH2a和1-FEH2b）的功能已有深入研究,但是转录水平如何调控1-FEH响应低温胁迫的机理仍不清楚。DREB转录因子可以调控下游基因以响应低温胁迫。本研究克隆了菊苣Ci DREB基因,并且对其进行了功能鉴定。克隆了1-FEH的启动子,分析其可能存在的转录因子结合位点,本研究旨在为解决菊苣受低温胁迫而影响菊粉产量和质量这一实际问题奠定相关理论基础。本论文主要研究结果如下:（1）利用实时荧光定量PCR分析候选转录因子在冷处理下与靶基因（1-FEH）的表达模式。研究发现,在成熟主根组织中Ci MYB3和Ci MYB5的表达与温度并无相关性。而转录因子Ci DREB1A和Ci DREB1C在冷处理下表达量上调,其表达量达到峰值后,1-FEH2a在低温下表现出强烈诱导。（2）使用双荧光素酶测定法对1-FEH的启动子进行体内瞬时反式激活测定。结果表明,Ci DREB1A和Ci DREB1C以5-7倍的诱导效应激活靶启动子;完全删除在1-FEH2a启动子上预测的DRE/CRT元件则消除了这种激活效应;进一步对该结合元件进行定点突变却未能消除Ci DREB对启动子的激活作用。（3）凝胶阻滞分析实验用于检测Ci DREB蛋白是否与其靶核酸1-FEH的启动子结合。结果显示,在1-FEH2a的启动子上没有发现Ci DREB1C与预测的DRE/CRT结合域能够直接结合的证据。根据本研究得出的结论,Ci DREB在上游调节1-FEH基因的表达以响应低温,这个转录调控途径可能存在其它辅助因子的参与。
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