佛手提取物对HepG2细胞凋亡影响及机制研究

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目的肿瘤的发生是因为细胞在化学、物理等致癌因素作用下,某些抑癌基因发生改变,失去对其生长的正常调控,最后导致异常增生。细胞凋亡是细胞的程序性死亡,是细胞生物体维持机体平衡的关键,在机体正常发育、自稳态的维持、免疫耐受的形成、肿瘤监控等过程中均发挥重要作用。因此,诱导癌细胞凋亡和抑制增殖,以此清除体内多余、受损或危险的细胞而不对周围的细胞或组织产生损害,是癌症治疗的重要研究方向。佛手中含有多糖类、黄酮类、挥发油、香豆素类、多酚类等多种活性成分,具有抗氧化、降血脂、抗肿瘤、神经保护等多种药理活性。本研究通过超声波辅助-溶剂浸提法提取佛手化学成分,并初步探索佛手醇提物及水提物对人肝癌系HepG2细胞凋亡影响及其相关机制,为佛手的开发利用提供理论基础和药理学依据。方法1.佛手化学成分的提取分离及物理性质检测。采用超声波辅助-乙醇热回流法提取佛手醇提物,芦丁法检测其黄酮含量;采用热水浸取法提取佛手水提物,木瓜蛋白酶-sevage法脱蛋白,活性炭法除色素,苯酚-硫酸法检测多糖含量,离子色谱仪检测其单糖组分及含量。2.佛手提取物对HepG2细胞增殖及凋亡影响。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Hochest 33258检测细胞核形态变化,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记法观察细胞内活性氧水平,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,蛋白印迹法(Western blot)检测Bax蛋白表达量。结果1.佛手醇提物黄酮含量为2.12±0.29%;水提物多糖含量为33.65±3.04%,离子色谱仪检测其各单糖组分总含量为358.26μg/mg,含量最高为半乳糖醛酸,占比59.56%,其次为阿拉伯糖,占比21.92%,半乳糖、鼠李糖、葡糖糖甘露糖分别占7.98%、3.35%、2.89%和2.34%,在佛手水提物中,岩藻糖、木糖、果糖、核糖、葡萄糖醛酸和甘露糖醛酸的含量较低。2.佛手醇提物和水提物对HepG2细胞具有一定的抑制增殖作用,且呈现剂量依赖效应。Hochest 33258染色结果显示,佛手提取物能使细胞核发生皱缩、碎裂,呈现出明显的凋亡形态;DCFH-DA荧光探针标记法结果显示,佛手提取物在一定范围内增强HepG2细胞内活性氧水平;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法结果显示,佛手提取物可提高HepG2细胞总凋亡率,抑制细胞增殖;Western blot结果显示,经佛手提取物培养处理后的细胞,其Bax蛋白表达量增加,提示佛手提取物诱导HepG2细胞凋亡的机制可能是通过线粒体凋亡通路实现的。结论佛手醇提物和水提物均能抑制HepG2细胞生长、增殖并诱导凋亡,其分子机制可能是通过线粒体凋亡通路实现的。
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