抗水稻恶苗病放线菌的分离鉴定及功能研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:youshulin
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水稻恶苗病是一种世界性水稻病害,主要由藤仓镰孢菌引起,发生在中国各稻区。最终致使水稻产量严重减少、稻米的质量大幅度降低,给农业生产带来巨大损失。我国目前主要使用化学防治的方法来控制水稻恶苗病,然而大量施用化学类农药必定会破坏生态环境,且会使致病菌产生抗药性。相比之下另一种防治方法—生物防治则安全可靠,其能保障农作物健康生长且对环境的污染小。因此利用生物防治方法控制水稻恶苗病具有重要意义。在生物防治的发展中,放线菌因其种类多,基数大且具有防病、杀虫、除草、促生等功能,渐渐脱颖而出,不断的被人们发掘。本研究主要通过对感染水稻恶苗病的稻田进行样品采集。对分离自健康及染病的水稻根际放线菌进行包括水稻恶苗病病原菌在内的广谱抗菌测试。对其次级代谢产物分离提取并进行抗水稻恶苗病活性验证,同时对活性菌关于水稻恶苗病防效、对不同作物的定殖能力和促生能力进行测试。探究活性菌株的拮抗能力,促生能力等对农业作物有益的潜在能力,来为农业上水稻恶苗病的防治以及微生物菌剂商品化提供菌种资源。主要结果如下:(1)于发病水稻茎部分离得到藤仓镰孢菌(Fusarium fujikuroi),于健康和感病水稻植株的根际土共分离放线菌135株。其中来自健康水稻植株的放线菌为47株,来自感病水稻植株的放线菌为63株,共存的放线菌为25株,感病植株在放线菌种类上有一定优势。(2)菌株C42具有广谱抗真菌活性且对水稻恶苗病的活性最好为61.27±0.02%,对菌株C42进行多相分类鉴定,结果表明,该菌株为一株链霉菌,与菌株Streptomyces scabiei NRRL B-16523~T(99.59%),菌株Streptomyces europaeiscabiei KACC 20186~T(99.52%)16S r RNA基因序列相似度最高且始终在一个进化分支上,该菌株符合链霉菌属的特征并根据其分离源将其命名为Streptomyces oryzagri。(3)用藤仓镰孢菌(Fusarium fujikuroi)进行水稻染病测试,结果表明致病菌10~7CFU/m L的孢子悬液对水稻的侵染性最强,接病发病率为84.22±0.71%,发病时间15-20天,病情指数45.91±0.45。菌株C42(10~9CFU/m L)的孢子悬浮液处理的水稻抵抗水稻恶苗病效果最佳,发病率从83.75±0.81%降低至22.73±0.87%,病情指数从45.57±0.75降低至18.77±0.47。(4)菌株C42具有产吲哚乙酸、溶磷和产几丁质酶的能力,对水稻、玉米、小麦和生菜均具有促生长效果。且能够提高作物的CAT酶活性、SOD酶活性、可溶性蛋白含量、叶绿素含量和类胡萝卜素含量。该菌可长期稳定的定殖于水稻、玉米、生菜等植物根际,接种后第20天定殖量的增长逐渐趋于平缓,分别为6.3×10~4CFU/g土壤干重、7.9×10~4CFU/g土壤干重和5.7×10~4CFU/g土壤干重,此外,其可定殖于三种植物根内,在接种第20天时的定殖能力分别为2.3×10~4CFU/g鲜根重、1.3×10~4CFU/g鲜根重和3.4×10~4CFU/g鲜根重,其根内定殖能力低于根际定殖能力。(5)经抗水稻恶苗病活性追踪,鉴定出两个化合物,分别为邻苯二甲酸二丁酯和phencomycin,最终验证了其对水稻恶苗病的活性。
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