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苹果锈果类病毒(Apple skin scar viroid，ASSVd)是危害苹果较为严重的非潜隐性病毒之一，也是我国苹果的重要检疫性有害生物。目前，国内外关于ASSVd检测方面研究较少，技术还不成熟，而且ASSVd传播方式知之甚少，尚无有效的防治措施。因此，我们建立了ASSVd准确、灵敏、快速的RT-PCR检测技术体系，同时，以携带ASSVd组培苗和无毒组培苗为试材，通过人工模拟田间不同传播途径，初步明确了在组培条件下ASSVd传播方式。本研究结果将为ASSVd的准确诊断提供可靠的方法，为果树苗木检疫、无毒苗木生产提供技术支撑。为阻止田间生产过程中ASSVd的侵入与传播提供理论依据，为有效预防苹果锈果病的发生奠定基础。取得的主要研究结果如下: 1、揭示了ASSVd河北保定分离物的基因组序列及其分类地位。以采自河北保定的ASSVd样本为试材，利用RT-PCR技术对样本中的ASSVd全基因组序列进行扩增，然后利用生物学软件MEGA6.0对该分离物与已发表的其它分离物序列构建系统发育树，对系统进化关系进行分析。结果表明，ASSVd保定分离物ASSVd BD-1基因组全长332nts，将序列提交到GenBank，登录号为KR264032。该分离物与已发表的其它13个来自不同寄主、不同国家的ASSVd分离物间进化关系极近，核苷酸相似性为92％～99％之间。与加拿大苹果上的分离物DAVd(GenBank登录号:X71599)亲缘关系最近，相似性为99％，仅在第221位有一个碱基差异，与新疆梨上的分离物ASSVd-Z7（GenBank登录号:JX861259）亲缘关系最远。系统发育分析表明:不同地区的ASSVd分离物聚类没有规律性，ASSVd不存在地区专化性。新疆梨、桃、杏、苹果不在同一分支，说明ASSVd可能存在一定的寄主特异性。二级结构预测表明，该分离物的中央保守区、末端保守区与ASSVd其它分离物相同。 2、建立了ASSVd常规RT-PCR及利用内标nad5基因为基础的RT-PCR检测体系。根据GenBank中已发表ASSVd基因组序列，选择保守区域，设计引物。以感染ASSVd田间苹果样本为试材，对已报道引物及自行设计引物进行筛选，对常规和以内标为基础的RT-PCR检测体系和程序进行优化。结果表明，自行设计引物ASSVdQxin3特异性最好，优化的常规PCR体系(25μL)中cDNA模板0.5μL、ASSVdQxin3-F/R引物(20pmol/μL)各1.0μL、ddH2O10μL、2×Es Taq MasterMix12.5μL;扩增程序中退火温度为64.4℃，循环次数为35，灵敏度达到能够检测3.75 ng新鲜样本中的病毒。优化的以内标为基础的PCR体系(25μL)中cDNA模板2μL、ASSVdQxin3-F/R引物(20pmol/μL)各1.0μL、nad5-F/R引物(20pmol/μL)各0.1μL、ddH2O8.3μL、2×Es Taq MasterMix12.5μL;扩增程序中退火温度为60.9℃，循环次数为35，灵敏度达到能够检测37.5ng新鲜样本中的病毒。 3、明确了苹果果实着色期最佳检测部位为幼嫩韧皮部，内标nad5基因为基础的ASSVd RT-PCR检测体系田间应用可靠性更高。利用优化的检测体系对苹果果实着色期不同部位进行检测，并验证了两种检测体系的田间应用可靠性。结果表明，果实着色期，染病植株的幼嫩叶片、一年生枝条韧皮部和木质部、果实及部分种子样本均能检测到病毒，最佳检测部位为幼嫩韧皮部，其在RT-PCR检测中条带亮度最高，特异性最好，且病毒检出率为100％，而种子作为检测材料，检出率为70％。利用内标nad5基因为基础的ASSVd RT-PCR检测体系和常规RT-PCR检测体系对保定市顺平县124株样品进行检测，常规检测体系病毒检出率为22.6％，以内标为基础的检测体系避免了假阴性现象，病毒检出率为24.2％。 4、明确了苹果锈果病田间发病呈逐年加重趋势，锈果病树田间分布有明显的发病中心。2012～20154年间对4个苹果园锈果病田间显症情况进行了调查，2014年对其中3个果园进行了RT-PCR检测分析。结果表明:果园12012-2015年发病率分别为3.0％、6.0％、7.0％和10.0％;果园22012-2015年发病率分别为19.4％、24.7％、29.0％和34.4％;果园32014-2015年发病率分别为16.0％和22.0％;果园42014-2015年发病率分别为9.1％和12.1％，发病率均逐年增加。2014年通过对3个果园进行RT-PCR检测分析发现，锈果病树田间分布有明显的发病中心，尤其2012年显症果树的周围发病中心明显。说明锈果病传播及显症需要一定的时间，显症受植株个体差异和外界气候等因素影响较大，推测可能通过根接传播。 5、明确了组培条件下ASSVd的传播途径。以携带ASSVd的组培苗和无毒组培苗为试材，通过模拟田间不同传播方式，运用RT-PCR检测技术，最终明确ASSVd可通过汁液沾染、根部吸收（根系紧密接触、含病毒培养基质）、组培工具交叉使用进行传毒，其中根系传毒是风险最高的传播途径;组培剪用75％酒精消毒后仍存在传毒风险。