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背景中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophils Extracellular Traps,NETs)是中性粒细胞一种特殊的坏死方式。最初研究发现其主要作用是抗菌,之后研究发现,各种刺激因子如炎症因子、LPS、佛波酯等都可以诱导中性粒细胞释放NETs。若NETs产生过多,或清除不彻底,将损伤正常组织,导致多种炎症性疾病的发生发展。目前研究表明中性粒细胞释放NETs在多种免疫相关肺部疾病中起着重要作用,如哮喘、肺间质纤维化、急性肺损伤等。哮喘是一种异质性慢性气道炎症性疾病,以气道炎症和可逆性的气道阻力为特征。中性粒细胞哮喘(NA)常见于激素耐受型哮喘和重症哮喘,气道中以中性粒细胞为主,缺乏有效的治疗方法。最新研究表明中性粒细胞哮喘患者气道中有大量NETs的蓄积,提示NETs在中性粒细胞哮喘发病中起重要作用,是NA一个新的治疗靶点。Nec-1作为一个程序化坏死的抑制剂,通过变构RIPK1激酶,抑制多种细胞的程序化坏死。本课题组前期研究发现Nec-1可以抑制中性粒细胞释放NETs,具有治疗急性或慢性炎症性疾病的潜力。因此,本课题拟进一步探讨Nec-1是否可以通过抑制中性粒细胞NETs释放缓解中性粒细胞哮喘的气道炎症,为中性粒细胞哮喘的治疗提供新思路。目的中性粒细胞哮喘气道中大量NETs的蓄积,常见于激素耐受型哮喘和重症哮喘。本课题旨在探讨Nec-1抑制中性粒细胞NETs释放的分子机制及是否可以缓解中性粒细胞哮喘的气道炎症。方法首先分离提取PMA刺激中性粒细胞释放的NETs,将分离提取的NETs与人支气管上皮细胞(16HBEs)体外共培养,观察不同浓度NETs对16HBEs的影响。其次构建OVA/CFA诱导的小鼠中性粒细胞哮喘模型,观察该模型支气管肺泡灌洗液(BALF)中NETs水平是否升高,进一步利用刺激剂PMA诱导NETs形成增多是否加重气道炎症。前期研究发现Nec-1可以抑制中性粒细胞释NETs,体内实验探讨Nec-1抑制中性粒细胞释放NETs是否可以缓解中性粒细胞哮喘的气道炎症。最后,通过活细胞成像动态分析及Western-blot实验探讨Nec-1抑制NETs释放的分子机制。结果体外证实NETs直接损伤人支气管上皮细胞,体内实验发现OVA/CFA诱导的小鼠中性粒细胞哮喘模型BALF中NETs水平升高,利用刺激剂PMA诱导NETs形成增多加重气道炎症。体内证实Nec-1抑制中性粒细胞释放NETs可以缓解中性粒细胞哮喘的气道炎症,降低BALF中NETs水平、总蛋白浓度、髓过氧化物酶活性和炎症因子水平。活细胞动态成像分析及Western-blot实验证实Nec-1通过抑制MLKL磷酸化在细胞膜成孔,阻止NETs释放。结论NETs直接损伤人支气管上皮细胞,Nec-1通过抑制MLKL磷酸化阻止中性粒细胞释放NETs,缓解中性粒细胞哮喘的气道炎症。