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系统性真菌病的发生率正在逐年上升。它是免疫缺陷患者死亡的主要原因之一。白念珠菌是其中最主要的病原菌。烯醇化酶能够催化磷酸甘油盐向磷酸烯醇式丙酮盐转变,同时也在糖异生过程中催化逆向反应。是一种高度保守的蛋白质。在白念珠菌系统感染过程中具有很强的免疫源性。对它的功能及生物活性的研究,有助于系统性念珠菌病的早期诊断,防治及阐明白念珠菌的致病机理。 本研究首先从白念珠菌菌体中分离出烯醇化酶,并对其酶学活力进行了测定。将白念珠菌标准菌株在沙氏培养基上37℃培养24小时后,收集酵母相细胞,以酶解法和超声波粉碎法破坏细胞壁和细胞膜。将所获的全菌蛋白质经50%及70%硫酸铵沉淀。然后经DEAE-Sephadex A-50凝胶柱和ConA-Sepharose-4B凝胶柱层析。除去杂蛋白。获得烯醇化酶。以聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测得所分离出酶蛋白的分子量为47KD。在体外建立部分糖代谢反应链。以此测得烯醇化酶在30℃时的活力为2950.0u/ml。并且计算出本分离方法的蛋白质得率6.0%。 采用多点注射法以白念珠菌烯醇化酶免疫家兔,并以酶联免疫吸附试验(ELISA)测定所获得的抗烯醇化酶血清效价最高为1:6400。烯醇化酶与感染白念珠菌家兔血清的免疫印迹显示它具有很高的特异性。与此同时也制备了抗白念珠菌全菌蛋白及非糖基化菌体蛋白的兔血清。在体外比较三种抗血清及白念珠菌感染的兔血清检测白念珠菌、季也蒙念珠菌、乳酒念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、酿酒酵母菌、黄曲霉和烟曲霉全菌抗原的效果。结果抗白念珠菌烯醇化酶血清表现出良好的特异性和敏感性。优于抗白念珠菌全菌蛋白及非糖基化菌体蛋白血清。 以环磷酰胺经腹腔给药抑制小鼠的免疫功能。然后再以白念珠菌孢子经尾静脉感染健康小鼠及免疫抑制的小鼠。通过免疫电泳技术以抗白念珠菌烯醇化酶血清检测小鼠血中白念珠菌。并以血培养方法加以对照。结果在健康小鼠抗白念珠菌烯醇化酶血清在第3天就可以测出1只小鼠血中白念珠菌抗原,而血培养到第7天才有阳性结果。在感染后第一周内,抗白念珠菌烯醇化酶血清可在28只免疫健全小鼠中的8只血中测出相应抗原。在免疫抑制小鼠抗白念珠菌烯醇化酶血清在感染第2天可测出1只小鼠血中白念珠菌抗原。而血培养到第6天才有1例阳性结果。在感染后第一周内,抗白念珠菌烯醇化酶血清可在28只免疫受抑制小鼠中的10只血中测出抗原。抗白念珠菌烯醇化酶血清所检测的阳性率高于血培养。两种方法有显著性差异(p<0.05)。 我们还观察了白念珠菌烯醇化酶对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活力的影响。白念珠菌烯醇化酶处理组的巨噬细胞在体外平均吞噬2.8±0.3个未经调理的白念珠菌孢子,而未处理组的巨噬细胞平均仅吞噬1.9±0.3个未经调理白念珠菌孢子。但如果在培养基