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目的:回顾性分析卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)助孕周期中取卵后脱颗粒时间、精子注射时间与ICSI实验室指标及妊娠结局的相关关系,探讨注射人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)及取卵后,脱颗粒和ICSI的适合时间,为改进ICSI流程、提高ICSI结局提供依据。方法:回顾性分析2013年1月至2013年12月于河北医科大学第二医院生殖医学科进行ICSI助孕患者的临床、实验室资料和妊娠结局资料。根据HCG注射时间、取卵时间、脱颗粒时间、ICSI时间,将HCG注射至ICSI时间分为:T1(取卵至脱颗粒时间)、T2(脱颗粒至ICSI时间)、T3(注射HCG至取卵时间)、T4(注射HCG至脱颗粒时间)、T5(注射HCG至ICSI时间)。①比较T1-T5与实验室指标如MII卵母细胞率、受精率、正常受精率、异常受精率、损伤率、卵裂率、优胚率的相关关系;②比较T1-T5与ICSI临床结局如种植率、临床妊娠率、流产率及活产率的关系;③分析实验室资料与妊娠结局的相关关系。结果:1患者的一般情况本研究共纳入195个ICSI周期。平均女方年龄28.44±3.76岁,平均基础卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平7.08±1.59 m IU/ml,平均基础雌二醇(estradiol,E2)水平45.09±34.65 pg/ml,平均基础黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平4.30±2.63 m IU/ml,平均促性腺激素(gonadotropin,Gn)天数10.12±1.653天,平均Gn用量2223.32±612.34iu。总获卵数2480个,平均获卵数12.72±4.84个,MII卵母细胞率82.58%,损伤率0.83%,受精率90.53%,正常受精率84.96%,卵裂率91.21%,优质胚胎率40.85%。种植胚胎数145个,种植率35.63%。临床妊娠率51.28%,其中3例异位妊娠,8例流产,89例分娩,均为活产,流产率为8.00%,活产率45.64%。2 T1-T5与实验室各指标的相关关系2.1 T1(取卵-脱颗粒时间)与实验室各指标的相关关系T1与MII卵母细胞率、受精率、正常受精率、异常受精率、损伤率、卵裂率、优胚率无相关性(P>0.05)。将T1分为0-1.5小时组和>1.5小时组,分别为83、112个周期。0-1.5小时组的MII卵母细胞率、受精率、正常受精率、卵裂率、优胚率分别为82%±14%、90%±12%、85%±13%、91%±12%和35%±22%。>1.5小时组的MII卵母细胞率、受精率、正常受精率、卵裂率、优胚率分别为83%±13%、92%±12%、86%±14%、92%±12%和41%±25%,两组比较,>1.5小时组均高于0-1.5小时组,但差异均无统计学意义。2.2 T2(脱颗粒-ICSI时间)与实验室各指标的相关关系T2与正常受精率及优质胚胎率负相关(Z=-2.293,P=0.022;Z=-2.171,P=0.03),与异常受精率、损伤率正相关(Z=2.293,P=0.022;Z=2.019,P=0.043),与MII卵母细胞率、受精率、卵裂率无相关性(P>0.05)。将T2分为0-3小时组、3-4小时组及>4小时组,分别为56、123和16个周期。损伤率分别为0.46%±2.1%、1%±7.4%、2%±4%,正常受精率分别为87%±14%、85%±13%、83%±15%。三组比较,0-3小时组的损伤率明显低于后两组,正常受精率明显高于后两组,但差异无统计学意义。2.3 T3(HCG-取卵时间)与实验室各指标的相关关系T3与受精率成负相关(Z=-2.445,P=0.015),与MII卵母细胞率、正常受精率、异常受精率、损伤率、卵裂率、优胚率、无相关性(P>0.05)。2.4 T4(HCG-脱颗粒时间)与实验室各指标的相关关系T4与受精率、卵裂率负相关(Z=-4.514,P<0.001;Z=-3.379,P=0.001),与MII卵母细胞率、正常受精率、异常受精率、损伤率、优胚率无相关性(P>0.05)。将T4分为38-38.5小时组和>38.5小时组,分别为61、134个周期。受精率分别为94%±8.7%、89%±13%,差异有统计学意义(u=-2.769,P=0.006),卵裂率分别为94%±8.8%、90%±13%,差异有统计学意义(u=-2.136,P=0.033)。2.5 T5(HCG-ICSI时间)与实验室各指标的相关关系T5与受精率、正常受精率及卵裂率成负相关(Z=-4.043,P<0.001;Z=-2.515,P=0.012;Z=-3.359,P=0.001),与异常受精率成正相关(Z=2.515,P=0.012),与MII卵母细胞率、损伤率、优胚率无相关性(P>0.05)。将T5分为40-42.5小时组与>42.5小时组,分别为161、34个周期。受精率分别为92%±10%、84%±17%,差异有统计学意义(u=-2.99,P=0.003);正常受精率分别为97%±13%、79%±16%,差异有统计学意义(u=-3.13,P=0.002);卵裂率分别为93%±10%、85%±17%,差异有统计学意义(u=-2.91,P=0.004)。3 T1-T5与妊娠结局各指标的相关关系取卵-脱颗粒时间(T1)与种植率、临床妊娠率、流产率及活产率无相关性(P>0.05)。将T1分为0-1.5小时组和>1.5小时组。0-1.5小时组的临床妊娠率、流产率、活产率分别为45.78%、7.89%和40.96%,>1.5小时组的临床妊娠率、流产率、活产率分别为55.36%、8.06%和49.11%,两组比较,后者临床妊娠率、流产率、活产率显著高于前者,差异有统计学意义(u=-12.36,P<0.001;u=-8.107,P<0.001;u=-12.36,P<0.001);两组种植率分别为33%±40%、38%±40%,>1.5小时组高于0-1.5小时组,但差异无统计学意义(P>0.05)。T2-T5与种植率、临床妊娠率、流产率及活产率均无相关性(P>0.05)。4实验室指标与妊娠结局的相关关系临床妊娠率与优质胚胎率正相关(χ2=4.16,P=0.041,B=1.293,OR=3.64,95%CI[1.05,12.62]),与MII卵母细胞率、受精率、正常受精率、异常受精率、损伤率、卵裂率无相关性(P>0.05)。种植率、流产率、活产率与MII卵母细胞率、受精率、正常受精率、异常受精率、损伤率、卵裂率及优胚率均无相关性(P>0.05)。结论:脱颗粒时间与精子显微注射时间与ICSI受精及妊娠结局可能存在密切相关。取卵1.5小时后脱颗粒,可能提高卵母细胞的成熟、受精能力及随后的发育潜能,从而影响妊娠结局。脱颗粒后3小时内行ICSI,可能更利于卵子的正常受精及胚胎发育。过度延长注射HCG后脱颗粒、ICSI时间,可能影响受精率和卵裂率,进而影响ICSI结局。