RNAi沉默COX-2对HSC-T6细胞趋化因子表达的影响

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目的:研究RNAi沉默COX-2对HSC-T6细胞趋化因子表达的影响。方法:1、将实验分为三组:空白对照组、HK空质粒组、COX-2shRNA1实验组。2、北京博奥生物有限公司的27K Rat Genome Array芯片扫描观察HK质粒对照组、COX-2shRNA1转染组不同时间段中HSC-T6细胞趋化相关因子的差异表达情况;3、Trizol法提取HSC中的总RNA,采用RT-PCR方法分步验证基因芯片所显示的相关基因差异表达结果。结果:1、荧光显微镜观察显示COX-2shRNA1重组质粒转染HSC-T6细胞株不同时间段,转染效率均在70%以上;2、按Ratio值≥1.5和≤0.667标准,沉默COX-248小时后,基因芯片扫描显示HSC-T6细胞中CXCL11、CX3CL1、CXCL10、CCL2表达均增加;3、按Ratio值≥1.5和≤0.667标准,沉默COX-272小时后,基因芯片扫描显示HSC-T6细胞中CX3CL1、CXCL10表达增加;4、RT-PCR验证COX-2shRNA1重组质粒转染HSC-T6细胞72小时后结果,证实CX3CL1mRNA表达增加,CXCL10mRNA、 CXCL11mRNA、 CCL2mRNA表达减少(p <0.05)。结论:1、COX-2shRNA1沉默COX-2后HSC-T6细胞相关的趋化因子基因表达谱发生变化;2、沉默COX-2不同时间段后HSC-T6细胞相关趋化因子的表达不尽相同;3、RT-PCR验证显示RNAi沉默COX-272小时后HSC-T6细胞趋化因子CX3CL1mRNA表达增加, CXCL10mRNA、CXCL11mRNA、CCL2mRNA表达减少。
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