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目的:探讨AZD-8055与氯喹(Chloroquine,CQ)联合应用对胆管癌细胞增殖、迁移、EMT进程的影响及其分子机制。方法:MTT 法检测 50nM、100nM、200nM 的 AZD-8055 及 5μM、10μM、20μM的CQ对胆管癌细胞HuCCT1和RBE增殖活力的影响,MTT法比较1OOnM的AZD-8055、Rapamycin、Everolimus 对胆管癌细胞 HuCCT1 和 RBE 增殖活力的影响,检测AZD-8055与CQ对人正常胆管上皮细胞HIBEpiC和胆管癌细胞HuCCT1和RBE增殖能力的影响。Chou-Talalay方法检测了 AZD-8055及CQ联合用药的指数(Combination index,CI)。MTT法检测AZD-8055及CQ联合应用对胆管癌细胞HuCCT1和RBE增殖活力的影响。平板克隆形成实验,EdU细胞增殖实验检测AZD-8055与CQ单独或联合使用对人胆管癌细胞HuCCT1和RBE增殖活力的影响;免疫荧光染色观察用药后胆管癌细胞内自噬小体的形成情况:Hoechst33342染色检测细胞内凋亡小休的数量,流式细胞术检测AZD-8055与CQ对胆管癌细胞系HuCCT1和RBE凋亡率的影响;划痕愈合实验和迁移实验检测AZD-8055与CQ单独或者联合用药对HuCCT1和RBE细胞的横向和纵向迁移能力的影响;蛋白印迹实验检测胆管癌自噬相关蛋白LC3、p62、p-ULK1、ULK1,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,Akt/mTOR信号通路及p-38信号通路相关蛋白的表达水平;结果:MTT结果显示,AZD-8055 50nM、100nM、200nM对胆管癌细胞HuCCTI的抑制率分别为22%、31%、47%,对胆管癌细胞RBE的抑制率分别为22%、27%、44%。而CQ在20μM时具有抑制胆管癌细胞增殖的作用(P<0.05)。MTT结果显示,在同等的1OOnM浓度下,与Rapamycin和Everolimus相比AZD-8055对胆管癌细胞的抑制作用最明显(P<0.05)。AZD-8055与CQ联合使用对人正常胆管上皮细胞HIBEpiC的增殖活力并没有明显的抑制作用,而对胆管癌细胞的抑制作用较为明显(P<0.05)。Chou-Talalay检测方法结果显示,胆管癌细胞HuCCT1和RBE联合用药指数均小于1(P<0.05)aMTT实验结果显示,AZD-8055与CQ联合应用与单独用药组相比对胆管癌细胞增殖的抑制作用更强,且呈时间依赖性(P<0.05)。平板克隆形成实验,EdU细胞增殖实验结果显示,AZD-8055与CQ联合应用与单独用药组相比对胆管癌细胞增殖的抑制作用更强(P<0.05);免疫荧光染色实验结果显示,联合用药组细胞胞浆中绿色荧光强度明显增强;Hoechst33342染色发现,与AZD-8055及CQ单独用药组相比,两药联合使用组的细胞中凋亡小体显著增多。流式细胞术结果显示相比于单独用药组,联合用药组细胞凋亡率更高(P<0.05);划痕愈合实验和迁移实验结果显示,与单独用药组相比,联合用药组细胞的横向和纵向迁移能力明显受到抑制(P<0.05);蛋白印迹实验结果显示,联合用药组自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p-62、p-ULK1的表达明显上调,ULK1的表达下调,凋亡相关蛋白Bax与抗凋亡蛋白Bcl2的比值明显增高,E-cadherin蛋白的表达显著上调,而Vimentin、snail、slug蛋白表达水平均明显下降;PI3K/Akt/mTOR相关蛋白Akt、S6、4EBP1蛋白磷酸化水平明显被抑制,而其总蛋白无明显变化;联合用药后p-p38的表达增高,而p-38的表达变化不明显。结论:1.AZD8055与CQ联合应用可以抑制胆管癌细胞的增殖能力,这可能与联合用药后通过抑制胆管癌细胞的自噬流并促进胆管癌细胞凋亡密切相关;2.AZD-8055与CQ联合应用后可以抑制胆管癌细胞的增殖、迁移及EMT进程,其机制与调控Akt/mTOR信号通路及p38/MAPK信号通路相关。