【摘 要】
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本研究首先采用两步酶消化法和差速贴壁法分离纯化毛囊来源干细胞,对其进行传代培养,测定生长曲线和克隆形成率;采用形态观察、诱导分化和标记基因检测的方法对毛囊来源干细胞
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本研究首先采用两步酶消化法和差速贴壁法分离纯化毛囊来源干细胞,对其进行传代培养,测定生长曲线和克隆形成率;采用形态观察、诱导分化和标记基因检测的方法对毛囊来源干细胞进行初步鉴定。其次选择褪黑素刺激毛囊来源干细胞增殖活性的最适浓度。最后对毛囊来源干细胞中褪黑素受体基因cDNA进行克隆测序分析。结果显示:1.分离得到的毛囊来源干细胞形态均一,体积小,呈典型的铺路石生长,生长曲线呈S型,克隆形成能力强;经诱导可以分化为脂肪细胞、成骨细胞和神经细胞;基因检测发现表达胚胎干细胞标记基因Oct4、Sox2、Nanog和毛囊来源干细胞标记基因Sox9、integrin-β1、CD34、CD200和CK15。2.褪黑素刺激毛囊来源干细胞的增值活性的最适浓度为500pg/m1。3.利用RT-PCR技术,克隆了绒山羊毛囊来源干细胞中MTNRIA、MTNRIB和ROR α基因的部分cDNA序列,基因片段长度分别为518bp、477bp和551bp。序列分析表明与其他牛科哺乳动物的同源性很高。MTNRIA基因片段与绵羊、牛的同源性高达95%以上;MTNRIB基因片段与绵羊、牛的同源性高达96%以上;RORα基因片段与绵羊、牛的同源性高达98%以上。
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