四逆散及其主要成分的免疫药理活性研究

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四逆散最早见于东汉张仲景所著《伤寒论》,此方剂由柴胡、白芍、枳实和甘草四味中药等量组成,中医传统理论认为其疏肝理脾,是经典的和解类方剂。四逆散中包含柴胡和芍药,柴胡和枳实,枳实和甘草这三个药对,原方稍作加减即可作为其他方剂而被广泛的应用于包括炎症性疾病在内的很多慢性疾病的治疗,因此,具有很高的研究和实用价值。然而,由于古今文化的差异,中医方剂的使用往往难以理解和操作,这也就限制了其应用,因此,研究着眼于阐述四逆散全方对现代分类疾病存在的治疗作用和作用机理,并阐明承担其药理活性的主要成分。   本论文的第一章研究了四逆散全方和方中中药甘草的主要成分甘草酸对三硝基苯磺酸导致的小鼠结肠炎的影响。实验结果显示,四逆散和甘草酸在较高剂量时,均可改善肠炎导致的腹泻和体重下降,二者均可不同程度的改善动物的死亡率,同时降低结肠组织炎症的严重程度。此外,高剂量的四逆散和甘草酸对于评价药物对结肠炎影响的常用指标如:MPO,TNF-α,IFN-γ,IL-10和IL-12亦有一定的改善效果。实验中特别值得注意的是:四逆散对结肠炎的改善效果要好于三倍于四逆散中含量的甘草酸。考虑到甘草酸的类似物甘草酸二铵因对炎症性肠病具有显著的改善作用而作为治疗药物被大量使用的事实,实验结果说明,四逆散,这一古老的中药复方,可能成为一种更加有效的替代疗法而被用于本论文的第二章研究四逆散中另一味中药柴胡的主要成分柴胡皂苷a对小鼠淋巴细胞增殖的影响。在炎症性肠病中的发病过程中T细胞扮演了极为重要的角色,为了寻找四逆散中其他可能承担四逆散对三硝基苯磺酸导致的小鼠结肠炎改善作用的单体成分,考察了四逆散中中药柴胡的主要成分柴胡皂苷a对T细胞增殖的影响。实验结果显示,对于刀豆蛋白以及抗CD3和抗CD28抗体引起的小鼠淋巴细胞的增殖,柴胡皂苷a均表现出强烈的抑制效果,且其抑制效果呈良好量效依赖性关系,而柴胡皂苷a对正常的小鼠淋巴细胞的活力无影响。柴胡皂苷a还可以增加刀豆蛋白活化后凋亡的T细胞比例,降低T细胞线粒体膜电位和促进细胞色素c由线粒体向胞浆释放,这些数据说明,柴胡皂苷a可以通过线粒体途径促进刀豆蛋白活化的T细胞凋亡,与此同时,柴胡皂苷a还可以通过调控细胞周期相关蛋白的表达,从而阻止活化后的T细胞进入细胞周期,进而抑制其活化后所发挥的生物学效应。此外,柴胡皂苷a对T细胞活化的主要标志之一的细胞表面抗原CD25和CD69的表达,以及T活化相关细胞因子IL-2,TNF-α和IFN-γ等的释放亦有显著地抑制效果,并可上调抗炎症细胞因子IL-10的表达。   综上所述,本研究中首次报道了四逆散对三硝基苯磺酸导致的小鼠结肠炎具有显著的改善作用,且其改善效果优于方中成分甘草酸;此外,方中另一成分柴胡皂苷a可通过同时促进细胞凋亡和阻滞细胞周期而抑制刀豆蛋白导致的小鼠淋巴细胞增殖。前者暗示了四逆散可能具有作为治疗炎症性肠病替代疗法的价值和中药复方相比于单体化合物的优越性;而后者则暗示了其改善效果可能是方中包括柴胡皂苷a和甘草酸在内的多种成分共同作用的结果。
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