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研究背景和目的中风是世界上致死致残最高的疾病之一,分为缺血性和出血性中风,其中缺血性中风的比例超过80%。缺血性中风是脑动脉区域内局部灌注可逆或永久性缺乏的后果,在中风发生后脑内存在复杂的病理生理学事件的序列发生,且随着中风事件的进展,神经元死亡、胶质细胞增殖和轴突变性等变化会向缺血核心区周围扩散。这种复杂性要求治疗途径不仅要靶向神经元也要靶向胶质细胞。随着免疫、炎症和再生成为中风研究的兴趣中心,胶质细胞在中风发病机制中的作用日益受到关注。银杏内酯B（Ginkgolide B,GB）是银杏植物独有成分,证据提示GB能改善人类伴随中风而来的神经病学功能缺陷,但所报道文献中存在一些矛盾数据。肽基精氨酸脱亚胺酶Ⅱ（peptidylarginine deiminase Ⅱ,PAD2）参与多种神经系统疾病的发病机制,但GB对其有无调控作用尚不得而知。本实验通过体内外实验探讨银杏内酯B对缺血性中风的保护效果及其通过PAD2介导胶质瘢痕降解的可能机制。实验方法使用细胞免疫荧光法和MTT法鉴定和检测体外培养新生24h大鼠原代大脑皮层星形胶质细胞的生存活性;通过共聚焦显微镜检测银杏内酯B对星形胶质细胞内钙离子的影响;制备大鼠MCAO模型;透射电镜观察培养的星形胶质细胞和整体动物脑的超微结构;冰冻切片免疫组化法检测各处理组大鼠脑GFAP和PAD2的表达情况。结果1、体外实验给药组:（1）银杏内酯B在25～200μmol/L浓度范围内对正常皮质星形胶质细胞（astrocytes,ASTs）生存活性未见明显影响。在此浓度范围内GB能提高Glu-Gly损伤ASTs的生存活性（P<0.05）,其中200μmol/L银杏内酯B效应最显著,故选择200μmol/L银杏内酯B作为后续体外实验的处理浓度。（2）GB给药组GFAP表达相较于Glu-Gly组减少,正常组星形胶质细胞GFAP成网片状均匀分布。Glu-Gly模型组星形胶质细胞形态回缩,GFAP分布散乱,GB给药组星形胶质细胞GFAP变化情况较模型组轻,趋向于恢复正常。（3）PAD2在正常ASTs中存在基础的表达活性,但Glu-Gly组ASTs中PAD2表达低于正常ASTs的基础表达;GB处理的Glu-Gly损伤的ASTs中,PAD2表达升高明显,显著高于正常ASTs的基础性表达。（4）GB给药组ASTs内钙离子浓度变化趋近于正常组星形胶质细胞中的钙变化。（5）电镜观察各处理组ASTs的超微结构,发现银杏内酯B处理后ASTs的线粒体形态基本正常,而Glu-Gly损伤组ASTs的线粒体形态不规则,部分线粒体水肿成球形,嵴碎裂交错,甚至模糊不清。预处理组:（1）GB预处理组GFAP表达较Glu-Gly组减少,正常组星形胶质细胞GFAP成网片状均匀分布。Glu-Gly模型组星形胶质细胞形态回缩,GFAP分布散乱,GB处理组星形胶质细胞出现少量损伤情况,但GFAP变化情况较模型组轻,趋向于恢复正常。（2）GB预处理组PAD2表达相较于Glu-Gly组增多,正常组星形胶质细胞PAD2基础表达高于Glu-Gly模型组,低于GB给药组。（3）GB预处理组胞内钙离子迅速增多,胞内[Ca2+]浓度升高程度较Glu-Gly组大。（4）电镜观察各处理组星形胶质细胞的超微结构,发现GB预处理结果与前述银杏内酯B处理结果（5）相似。2、体内试验（1）MCAO大鼠损伤24h后脑梗塞范围通过TTC染色法,对照组无白色梗塞灶形成,MCAO模型组大鼠皮质及纹状体有大面积梗塞灶形成,GB 5mg/kg给药组与30mg/kg给药组相对梗塞面积较MCAO模型组减少。（2）HE染色表明,MCAO大鼠GB给药24h后,GB给药脑组织的损伤程度明显轻于MCAO模型组的损伤程度。（3）各处理组大鼠脑皮质的超微结构,发现GB给药组与预处理组的线粒体形态正常,而Glu-Gly模型组星形胶质细胞出现线粒体形态不规则,嵴碎裂交错,甚至模糊不清。观察各组脑毛细血管发现对照组:内皮细胞扁平,表面平滑,基膜完整,紧密连接清晰,星形胶质细胞的足突正常;模型组:微血管横切面见内皮细胞肿胀明显,基底膜模糊不清,毛细血管周围水肿明显,毛细血管周围的足突肿胀,可见周细胞的核断裂,血管周边可见小胶质细胞,管腔中可见血小板;GB给药24h组:水肿略微减轻,常规毛细血管管腔,基膜连续,毛细血管周围的足突肿胀略微减轻。GB预处理血管皱缩明显,似乎更差。（4）GB治疗与预处理组的大脑皮质和扣带回结构处GFAP的表达量明显低于MCAO组,略高于对照组。（5）GB给药组与预处理组的大脑皮质和扣带回结构部位中,PAD2的表达明显高于MCAO组,略高于对照组。结论1、银杏内酯B给药可一定程度的减少Glu-Gly介导的星形胶质细胞损伤,提高星形胶质细胞的存活率,且该作用存在有效的剂量范围2、银杏内酯B可能通过升高星型胶质细胞胞内Ca2+浓度激活PAD2,进而抑制GFAP表达即Ca2+↑—PAD2↑-GFAP↓通路发挥保护作用。