肺癌细胞内葡萄糖检测的微洞芯片设计及应用

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangxing0828
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良恶性胸腔积液(pleural effusion,PE)的辨别一直是临床上的重点与难点。因此寻找快速、有效的胸水肿瘤细胞筛选方法,准确判断胸腔积液性质,对胸水相关疾病的诊治与研究具有重要临床意义。与正常细胞比拟,肿瘤细胞具备显著葡萄糖摄入的特征。基于此,本课题用肺癌细胞模拟胸水肿瘤细胞,利用微阵列分析技术(microarray analysis),结合电致化学发光(Electrochemiluminescence,简称ECL),通过对单个肺癌细胞内葡萄糖含量的检测,实现单个肺癌细胞的高通量、平行、快速分析,以为后期将该技术应用于胸水癌细胞的筛查提供实验基础。本课题设计了镀金的聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)微洞芯片,并与以SU-8光刻胶光刻显影后制备的ITO微洞芯片进行电化学发光强度的对比,结果显示镀金的PDMS微洞芯片其电化学发光强度是该ITO微洞芯片的5倍,说明镀金的PDMS微洞芯片具有更加灵敏的检测度。我们又用该镀金的PDMS微洞芯片对过氧化氢进行电化学发光的浓度梯度检测,其检测范围为10μM到1000μM,最低检测浓度为10μM。检测结果进一步表明,镀金的PDMS微洞芯片具备高灵敏性。此外,我们用设计的镀金PDMS微洞芯片对单个A549细胞内葡萄糖进行检测,并比较不同洞高对A549细胞内葡萄糖发光强度的影响。检测时我们利用Trition-100破损细胞膜,释放单个A549细胞内的葡萄糖到微洞中和微洞内的葡萄糖氧化酶反应生成H2O2并与溶液中鲁米诺的衍生物(L012)反应,在施加的电压下产生光信号。结果显示45μm洞深的镀金PDMS微洞芯片其A549细胞内葡萄糖的光信号明显强于25μm洞深的芯片,说明微洞深度对单个A549细胞内葡萄糖的信号检测具有明显影响。并且进一步对A549细胞进行饥饿处理以及不加酶检测,实验结果与实验组相反,未检测到微洞内单个A549细胞内的葡萄糖的信号,进一步说明我们所设计的45μm洞深的镀金PDMS微洞芯片对单个A549细胞内葡萄糖检测具有可行性。因此,该课题设计的镀金PDMS微洞芯片能为下一步我们在胸水癌细胞筛查的在体实验中提供技术支持。
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