帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是最常见的神经退行性疾病之一，临床主要表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓及姿态反射障碍，多数伴有自主神经功能障碍。随着我国人口老龄化进程的加快，PD的发病率日益增高，发病人数逐年增加，目前我国的PD患者已超过200万。现阶段PD的治疗存在着局限性，无根本性治疗方法，远期疗效差，PD将势必影响我国老年人群的生活质量，给患者、家庭和社会造成严重的精神和经济负担。因此，解析PD发病机理以及寻找疾病的治疗新策略尤为重要。黑质中多巴胺能神经元变性坏死是PD的病理特征，其原因尚不清楚，目前普遍认为氧化应激和线粒体功能障碍在其中起着重要的作用。因此抗氧化剂在PD发病和治疗中的作用日益引起人们的重视，成为研究热点。胆红素是血红素的代谢终产物，在传统观念中被认为是代谢废物，具有毒性作用。但是越来越多的研究显示胆红素是体内唯一内源性溶脂性抗氧化剂，具有强大的抗氧化、抗炎作用。胆红素与冠心病和糖尿病等疾病的发病关系已经得到了一定的证实。胆红素对神经元和海马组织具有抗氧化神经保护作用。但是胆红素与PD发病的关系以及对多巴胺能神经元的作用尚未见报道。本研究拟通过回顾性病例资料分析探寻胆红素与PD发病的可能关系。并进一步建立体外PD细胞模型，从细胞水平上评判胆红素对PD的作用及可能机制。第一部分帕金森病患者血清胆红素、尿酸和血脂水平的观察目的：观察分析帕金森病患者血清胆红素（IBIL）、尿酸（UA）和血脂（TCH, TG,HDL-C, LDL-C）水平，探讨胆红素与PD的可能关系。方法：选取徐州市中心医院2006年1月-2012年9月的住院及门诊患者PD患者250例作为PD组，同时以同期体检中心随机选取年龄配对的259名健康体检人群为对照组，检测并记录血清胆红素（IBIL），尿酸及血脂（TCH、TG、HDL-C和LDL-C）水平，进行对比分析。结果：PD组血清IBIL水平（8.36±2.80μM ol/L）明显低于对照组比（9.15±2.58μMol/L）（P=0.015）; PD组UA水平（241.26±59.45μMol/L）亦明显低于对照组（300.09±60.06μMol/L）（P=0.000）。PD女性亚组IBIL水平显著低于男性亚组，分别为（7.70±2.69μMol/L）和（8.71±2.82μMol/L）；女性亚组UA水平亦显著低于男性亚组，分别为（215.11±57.99μMol/L）和（254.97±55.80μMol/L）（P＜0.05）。PD各年龄亚组和各H&Y分级亚组IBIL和UA水平无显著性差异（P＞0.05）。对照组IBIL与UA有显著正相关性（r=0.229，P＜0.01），而PD组IBIL与UA无显著相关性（r=-0.032，P＞0.05）。PD患者TCH水平显著低于对照组，分别为（4.44±0.87mmol/L）和（4.94±0.90mmol/L）（P＜0.05）；PD患者LDL-C水平显著低于对照组，分别为（2.66±0.70mmol/L）和（3.21±0.84mmol/L）（P＜0.05）；而PD患者TG水平、HDL-C水平无显著性差异（P＞0.05）。PD组男性亚组TCH水平显著低于女性亚组，分别为（4.26±0.76mmol/L）和（4.79±0.95mmol/L）（P＜0.05）；男性LDL-C水平显著低于女性，分别为（2.55±0.62mmol/L）和（2.86±0.81mmol/L）（P＜0.05）。PD组不同年龄亚组及不同H&Y分级亚组TCH、TG、HDL-C和LDL-C水平无显著性差异（P＞0.05）。结论：PD患者血清IBIL和UA水平显著降低，PD组女性IBIL和UA水平较男性显著降低。IBIL和UA水平与患者年龄和病情严重程度无相关性。健康人群中IBIL与UA水平正相关，而PD患者IBIL与UA水平无相关性。PD患者血清TCH和LDL-C水平显著降低，男性患者更低于女性患者。第二部分胆红素预处理减轻6-OHDA对SH-SY5Y细胞的损伤作用目的：明确胆红素预处理减轻能否减轻6-OHDA对SH-SY5Y细胞的损伤作用。方法：利用6-OHDA和SH-SY5Y细胞建立体外PD细胞模型，观察不同浓度6-OHDA作用24h对SH-SY5Y细胞形态、MTT还原率和LDH释放的影响；观察不同浓度胆红素作用4h、24h、48h对SH-SY5Y细胞形态、MTT还原率和LDH释放的影响。以此筛选出6-OHDA和SH-SY5Y细胞适宜的培养浓度和培养时间。最后以筛选出的适宜浓度胆红素预处理SH-SY5Y细胞（处理时间为筛选出的适宜时间），再予筛选出的适宜浓度6-OHDA作用于SH-SY5Y细胞，观察细胞形态，检测MTT还原率和LDH释放。结果：25μM、50μM、100μM，150μM，200μM浓度6-OHDA作用于SH-SY5Y细胞24h后，与对照组相比MTT还原率显著降低， LDH释放量显著升高（P＜0.05），并且随着作用浓度的升高而逐渐改变。6-OHDA可使细胞活性降低，胞膜完整性破坏。1μM、5μM、10μM、15μM、30μM浓度胆红素分别作用于SH-SY5Y细胞4h，30μM组细胞MTT还原率明显低于对照组（P＜0.05）；作用24h：10μM组MTT还原率升高，LDH释放量也显著降低（P＜0.05，VS对照组&4h）；30μM组MTT还原率明显降低，LDH释放量显著增高（P＜0.05，VS对照组&4h）。作用48h：1μM、5μM、10μM组细胞活性显著升高，LDH释放量也显著降低（P＜0.05，VS对照组&24h），尤其以10μM组细胞变化更明显；30μM组细胞活性明显降低，LDH释放量显著增高（P＜0.05，VS对照组&24h根据上述结果，设置对照组（不加胆红素，也不加6-OHDA）、未处理组（不加胆红素，0μM）、1μM、5μM、10μM、15μM、30μM浓度胆红素预处理4h，100μM6-OHDA作用SH-SY5Y细胞24h，检测MTT还原率和LDH释放量。与未处理组相比，1μM、5μM、10μM胆红素预处理4h，MTT还原率显著增高，LDH释放量显著减少（P＜0.05）。结论：6-OHDA可诱导SH-SY5Y细胞发生损伤，其损伤作用呈现明显的浓度依赖性。30μM胆红素对SH-SY5Y细胞有毒性作用。10μM胆红素预处理可以显著减轻6-OHDA对SH-SY5Y细胞的损伤作用。第三部分胆红素减轻6-OHDA对SH-SY5Y细胞损伤作用的机制研究目的：探讨胆红素预处理减轻6-OHDA对SH-SY5Y细胞损伤作用的机制。方法：予10μM浓度胆红素预处理4h，100μM6-OHDA作用SH-SY5Y细胞24h，分别检测细胞内ROS和MDA水平；SOD活性和GSH水平；以及Caspase-3活性和凋亡细胞数量。对照组不予胆红素预处理，代之以等量NaOH，也不加6-OHDA诱导，代之以等量PBS。未处理组：不加胆红素（0μM），代之以等量NaOH。结果：对照组、未处理组和预处理组细胞内ROS水平分别为：1±0.23、2.56±0.75和1.69±0.35；MDA水平分别为：0.56±0.24nmol/mgprot、2.07±0.32nmol/mgprot和1.39±0.23nmol/mgprot；SOD活性分别为：24.35±1.27U/L、10.53±1.35U/L和16.15±1.72U/L；GSH水平分别为：10.19±1.67μMol/g、2.98±0.75μMol/g和5.79±1.30μMol/g；Caspase-3活性分别为：1±0.24、1.89±0.55和1.46±0.22；凋亡细胞比例分别为：4.47±0.35%、10.74±0.95%和7.05±0.56%。与对照组比较，未处理组和预处理组细胞内ROS和MDA水平显著升高（P＜0.05），SOD活性和GSH水平显著降低（P＜0.05）。Caspase-3活性显著增强，凋亡细胞比例显著增多（P＜0.05）。预处理组与未处理组相比，ROS和MDA水平显著降低，SOD活性和GSH水平显著升高。Caspase-3活性显著降低，凋亡细胞比例显著减少。结论：6-OHDA的毒性作用表现为使细胞内ROS和MDA水平显著升高；SOD活性和GSH水平显著降低；Caspase-3活性显著增强，凋亡细胞比例显著增多。10μM胆红素预处理可通过降低氧化物质ROS和脂质氧化产物MDA水平，提高抗氧化物质SOD活性和GSH水平，降低Caspase-3活性显著增强，减少凋亡细胞比例，明显减轻6-OHDA的毒性作用。结论1．PD患者血清IBIl和UA水平均下降，提示胆红素可能和UA一样参与了PD的发生和发展过程中。2.30μM胆红素对SH-SY5Y细胞有毒性作用，10μM胆红素预处理可以减轻6-OHDA对SH-SY5Y细胞的毒性作用，对PD细胞模型具有神经保护作用。3.胆红素可减缓6-OHDA介导的SH-SY5Y细胞内ROS、MDA升高和Caspase活性增强，提高SOD活性和GSH含量，减少凋亡的发生。4.胆红素可能通过调节氧化与抗氧化的平衡实现对PD细胞模型的神经保护作用。胆红素对脂质过氧化的抑制可能是其首要的抗氧化作用。