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肉鸡养殖中金刚烷胺类药物的残留是肉鸡食品安全监控和检测的难题,药物残留的靶组织还未见报道,在实际生产中不便于监控;国内外对金刚烷胺残留检测的研究大多是采用色谱-质谱分析的确证技术,该技术要求昂贵的设备和更高的操作技术,且前处理过程复杂,在实际筛查中受到一定的限制,因此有必要建立更为完善的监控体系和便捷的筛查方法以实现对肉鸡产品中金刚烷胺药物残留的有效监控。基于转录组学寻找生物标志物为畜产品中违禁添加物的筛查提供了新的技术手段,且可以实现对同类药物的有效监测。因此本研究探讨了金刚烷胺在肉鸡不同组织中的残留和消除规律,为肉鸡组织中金刚烷胺残留的理想靶标的选择提供一定的依据,同时分析了金刚烷胺在肉鸡胸肌和肝脏组织中的转录组学变化,筛选差异表达基因,发现候选转录组学生物标志物,初步建立监测方法和模型优化,为肉鸡养殖环节金刚烷胺的滥用提供新的筛查方法和完善的监控体系。主要研究内容及结果如下:(1)肉鸡胸肉、肝脏和血浆组织中金刚烷胺残留的LC-MS/MS检测和消除规律。结果表明,样品采用Qu EChERS法进行提取和净化,胸肉、肝脏、血浆组织的检出限分别为0.30μg/kg/0.50μg/kg/0.34μg/kg,定量限分别为1.00μg/kg/1.67μg/kg/1.10μg/kg,在10μg/kg、100μg/kg添加水平时,胸肉、肝脏和血浆中加标回收率分别为88.5%~92.6%/93.6%~99.7%/87.2%~95.5%,胸肉、肝脏和血浆中相对标准偏差分别为4.0%~5.1%/4.4%~5.7%/5.7%~6.3%,符合残留分析的要求。胸肉、肝脏和血浆组织中金刚烷胺的残留浓度随着给药剂量的增加而升高,随着停药时间的延长逐渐降低,直至消除。胸肉和血浆组织中金刚烷胺的残留浓度较为接近,消除的半衰期分别为9.7h和8.6h,消除速度较快;肝脏组织中金刚烷胺的残留浓度在整个试验期都高于胸肉和血浆组织,消除半衰期为11.1h,在停药312h后仍有较高的残留浓度,金刚烷胺残留的消除速度较慢,因此肝脏组织可作为监测肉鸡食品中金刚烷胺非法使用的靶标。(2)金刚烷胺在肉鸡胸肌和肝脏组织的转录组学变化。结果显示,饲喂金刚烷胺药物后,在肉鸡胸肌组织中筛选出170个差异表达基因,其中120个上调,50个下调,差异基因的GO term主要集中在水解酶活性、免疫反应、趋化因子活动等,KEGG显著富集在吞噬体、细胞粘附分子、溶酶体及ECM受体反应等pathway中。在肉鸡肝脏组织中筛选出172个差异表达基因,其中116个上调,56个下调,差异基因的GO term和催化活动、代谢活动、氧化还原活动、免疫反应、辅因子结合等功能有关,KEGG显著富集在代谢、粘着斑、ECM受体反应及药物代谢细胞色素P450等pathway中。根据差异基因的表达量、显著水平以及其功能注释和可能参与的生物学过程,在肉鸡胸肌和肝脏组织中进一步筛选出跟金刚烷胺药物处理相关的候选差异表达基因各11个和9个,且qRT-PCR验证结果与RNA-seq数据基本一致,表达量接近。在两个组织中,qRT-PCR数据的主成分分析结果均能很好的区分处理组样品和对照组样品。研究结果为进一步揭示金刚烷胺在肉鸡胸肌和肝脏组织中残留的分子机制奠定了基础,为转录组学生物标志物的筛选和监测模型的建立提供了依据。(3)转录组学生物标志物监测金刚烷胺方法的建立及优化。结果显示,结合两个组织20个目的基因的判别分析对交叉验证分组案例中95.3%的样品进行了正确分类,较胸肌和肝脏组织分别提高了10.9%和3.1%,因此结合两个组织的目的基因寻找生物标志物能够更加准确的对样品进行区分,降低假阳性比例。同时基于VIP值筛选到11个基因,分别为肝脏组织中的THRSP、DIO1、ETNPPL、GPAM、SIK1、ADRA1D、RET和胸肌组织中的ENSGALG00000000162、PDK4、PTGDS、CCL4,该组基因作为生物标志物能够较好的区分处理组样品和对照组样品,判别分析时交叉验证正确分类的比例达到95.3%以上,与两个组织20个基因的分析结果完全一致。基于两个组织11个基因对8个待测样品的判别完全正确,验证了该组基因作为生物标志物时的有效性和正确性,因此结合胸肌和肝脏组织的11基因作为生物标志物可以实现对肉鸡养殖中金刚烷胺滥用的监测。