鸭、鹅等水禽均为我国主要的养殖禽类,占全世界总量的75.0%。但是,鸭的病毒病对我国养鸭业造成严重的危害,并引发一系列公共卫生安全问题。高迁移率族蛋白B2(HMGB2)是一种高度保守的核蛋白,广泛存在于哺乳动物细胞中,其表达水平能发挥促炎作用,成为近年来危重医学研究的热点。HMGB2有黏性能并且和细胞表面相异的分子进行结合,是一个具有高亲和力受体。HMGB2在病毒核酸诱导的先天性免疫反应中能发挥哨兵作用,但是如细胞中无HMGB2,细胞是否被病毒感染缺乏统一的标准。所以,本研究进而系统的对鸭HMGB2(duHMGB2)在宿主抗鸭瘟病毒感染先天性免疫中的作用进行了研究,内容主要分为三个部分:第一部分duHMGB2基因的扩增与序列分析根据预测的duHMGB2的基因序列设计鉴定引物,然后再提取樱桃谷肉鸭的脾脏组织RNA,通过反转录得到相应的cDNA模板,最后使用特异性引物(duHMGB2-F1/R1)通过扩增从而得到所需要的目的片段,然后通过测序后得到蛋白质编码区(CDs)由624bp组成,编码207个氨基酸,其分子量约为24kDa。根据系统进化树的结果发现,本研究克隆的duHMGB2序列与原鸡的同源性最高,且与哺乳类和爬行类的亲缘关系较远。第二部分duHMGB2在健康鸭组织中的分布情况使用荧光定量PCR的方法检测健康鸭体内健康组织中duHMGB2的分布情况,参比组织为脾脏,GAPDH基因为内参。显示了HMGB2在健康鸭体内心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、小脑、脑干、胸腺、胰腺、法氏囊、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、皮肤、肌肉、腺胃、肌胃、气管和食管21种组织中的表达情况。根据结果显示健康樱桃谷肉鸭体内中气管、空肠、脾脏,胸腺,胰腺和皮肤中的HMGB2的表达量较高,气管中表达量最高,空肠次之。HMGB2在肝脏,肾脏,法氏囊,回肠,十二指肠等的表达量较弱。以上结果表明,HMGB2广泛的分布在鸭体内中,并且可能作用在宿主的先天性免疫反应过程中。第三部分duHMGB2在宿主抗鸭瘟病毒先天性免疫中的作用为了分析鸭duHMGB2在宿主抗鸭瘟病毒感染先天性免疫中的作用,本研究中构建duHMGB2的真核表达质粒和siRNA干扰质粒;比较病毒在不同细胞中的增殖情况,并分析上述细胞中模式识别受体和细胞因子的表达,确定duHMGB2是否具有抗病毒感染能力及介导的信号通路,结果表明:(1)重组真核表达质粒pcDNA3.0(+)-duHMGB2-Flag能在鸭胚成纤维(DEF)细胞中成功表达,且将重组质粒转染到DEF细胞48hpi后,duHMGB2多数定位于细胞核中;(2)将pcDNA3.0(+)-duHMGB2-Flag与报告质粒(pGL3-NF-kB与pGL3-IRF7)与pRL-TK质粒共同转染DEF细胞;36h后收获细胞并测量荧光素酶活性,结果表明:duHMGB2转染DEF细胞后NF-κB表达水平高于对照组细胞(P<0.05),实验组和对照组中IRF-7的表达水平无明显差异(P>0.05);(3)duHMGB2转染后的DEF细胞与对照组细胞TLR2、IFN-α、IFN-γ、IL-1β水平无统计学意义(P>0.05);duHMGB2转染后的DEF细胞RIG-I水平低于对照组细胞(P<0.05);TLR3、TLR4、OAS、PKR、Mx、IFN-β、TNF-α及IL-6水平均高于对照组细胞(P<0.05);(4)抗病毒实验结果表明,在细胞中过表达duHMGB2时,鸭瘟病毒(DPV)的复制能力受到抑制,通过RNA干扰方式敲低细胞中duHMGB2时,DPV的复制能力增强。表明duHMGB2具有抗DPV感染的功能。本实验成功克隆了duHMGB2的基因序列并进行了相关生物学分析,检测了duHMGB2在健康鸭组织中的分布情况以及病毒感染后的表达情况,进一步分析了其在抗DPV先天性免疫中的作用。研究结果为深入研究duHMGB2在宿主抗鸭瘟病毒先天性免疫中的作用奠定了基础,并为疫苗佐剂的筛选提供了科学依据。