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第一部分：脑胶质瘤细胞体外培养低氧微环境模型的建立[目的]低氧微环境在肿瘤组织的生长、代谢、侵袭以及耐药等过程中发挥着重要作用。该部分研究通过模拟肿瘤体内生长环境,建立脑胶质瘤细胞体外培养低氧微环境模型,并对其有效性进行验证。[方法]通过三气培养箱建立低氧微环境；将脑胶质瘤细胞T98G设为低氧处理组(3%02)和常氧对照组(21%02),分别于培养24h、48h、72h利用免疫细胞化学发光法,通过荧光显微镜观察HIF-1a表达情况,并于培养48h时通过RT-PCR技术对HIF-1a表达量进行检测,以明确该三气培养箱能否模拟肿瘤组织内的低氧微环境。[结果]荧光显微镜观察发现低氧处理组及常氧对照组脑胶质瘤细胞于培养24h、48h、72h均有HIF-1a稳定表达,且多位于细胞核内,低氧处理组荧光比常氧对照组明显较强；RT-PCR结果显示：低氧处理组HIF-1a表达水平较常氧对照组明显较高。(P<0.05)[结论]三气培养箱能稳定模拟肿瘤组织内的低氧微环境。常氧及低氧培养的脑胶质瘤细胞均可表达HIF-1a,多位于mRNA水平,但低氧环境下,HIF-1a局表达。第二部分：低氧微环境对脑胶质瘤细胞凋亡的影响[目的]通过体外培养脑胶质瘤细胞低氧微环境模型,初步探讨低氧微环境对脑胶质细胞和脑胶质瘤细胞凋亡的影响。并考虑细胞低氧环境下糖酵解提供能量,探讨无糖逆境中,低氧微环境对脑胶质细胞及脑胶质瘤细胞凋亡的影响。[方法]通过三气培养箱建立低氧微环境；将正常脑胶质细胞HAC和脑胶质瘤细胞T98G分别设为常氧常糖组(21%O2-High G)和低氧常糖组(3%O2-High G),于3%氧浓度下培养24h、48h.72h、96h, Hoechst33342染色,荧光显微镜观察细胞凋亡情况；AnnexinV/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。考虑细胞低氧环境下糖酵解提供能量,用无糖培养基,将两种细胞设常氧常糖组(21%O2-High G)、常氧无糖组(21%O2-No G)和低氧无糖组(3%O2-No G),分别于3%氧浓度下培养48h、72h,相同方法检测细胞凋亡。MTT检测3%02各组细胞存活及增殖情况。[结果]正常脑胶质细胞HAC和脑胶质瘤细胞T98G培养24h、48h、72h、96h,低氧常糖组(3%O2-High G)与常氧常糖组(21%O2-High G)相比,荧光显微镜下未见明显细胞凋亡,流式细胞检测无明显细胞凋亡(P>0.05)。正常脑胶质细胞HAC和脑胶质瘤细胞T98G培养48h、72h,常氧无糖组(3%O2-High G)和低氧无糖组(3%O2-High G)分别与常氧常糖组(21%O2-High G)相比,荧光显微镜下均见细胞凋亡,流式细胞检测细胞凋亡明显(P<0.05)；与低氧无糖组(3%O2-High G)相比,常氧无糖组(3%O2-High G)细胞凋亡更明显(P<0.05)。MTT检测发现,低氧无糖组细胞较常氧无糖组生长好(P<0.05)。[结论]3%及以上低氧微环境不能诱导正常脑胶质细胞及脑胶质瘤细胞发生凋亡；无糖逆境可诱导细胞凋亡；适度低氧微环境对无糖逆境中的正常脑胶质细胞及脑胶质瘤细胞有抑制凋亡,促存活和增殖作用。