橡胶树胶乳糖酵解关键酶-磷酸果糖激酶的分离及功能分析

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橡胶树胶乳再生能力是决定其产量的关键因素之一。糖酵解为胶乳再生提供了物质及能量,特别是为橡胶烃合成提供碳骨架,因此糖酵解与胶乳再生密切相关。磷酸果糖激酶是糖酵解代谢中的关键限速酶,此酶的活性决定糖酵解的代谢速率,加速糖酵解速率将有助于增加胶乳再生能力从而提高橡胶产量。本研究从橡胶树中成功分离依赖ATP的磷酸果糖激酶7个(Hb PFK1-7)以及依赖PPi的磷酸果糖激酶2个(Hb PFP1-2);利用转化酵母突变株RL257的恢复实验,确定Hb PFK1-4及Hb PFP1具有磷酸果糖激酶的活性,其重组蛋白的酶活检测再次确定Hb PFK1-2具有磷酸果糖激酶活性;聚类分析结果显示同一物种PFK家族成员之间氨基酸差异较大,进化分析结果暗示PFK家族的分化早于物种间的分化;Hb PFKs和Hb PFPs在不同组织中存在特异表达,Hb PFK1在树皮中高表达,Hb PFK2在胶乳中高表达,为胶乳磷酸果糖激酶关键成员;Hb PFKs与Hb PFPs对7种植物激素或激素类似物,伤害、死皮及高低温胁迫均产生不同程度的应答反应;在割胶处理下,胶乳中柠檬酸含量增加,Hb PFK2呈现下降后上升的表达趋势,磷酸果糖激酶酶活性减弱;在ET处理下,胶乳中柠檬酸含量降低,Hb PFK2基因呈下降趋势,磷酸果糖激酶活性增强。综合以上结果表明:橡胶树磷酸果糖激酶家族基因Hb PFK1-4及Hb PFP1是具有磷酸果糖激酶活性的功能基因,其中Hb FPK2为胶乳中的关键成员,割胶及ET处理能明显调控胶乳磷酸果糖激酶活性,其活性受胞质柠檬酸含量的调控。本结果有助于阐明橡胶树胶乳糖酵解代谢关键酶磷酸果糖激酶参与胶乳再生的调控机理,为橡胶树定向分子改良提供重要的靶基因。
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