论文部分内容阅读
目的:建立一种同时定量人血浆中杜鲁特韦（Dolutegravir,DTG）和雷特格韦（Raltegravir,RAL）浓度的高效液相色谱串联质谱（High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS）方法,同时建立一种定量人血浆中替诺福韦（Tenofovir,TFV）浓度的LC-MS法。用建立的方法测定中国成年艾滋病患者体内的DTG,RAL和TFV的血药浓度,并建立群体药代动力学（Population Pharmaocokinetics,PPK）模型,考察人口学,肝肾功能指标及合并用药等因素对三种药物群体药动学的影响,为临床个体化给药提供指导,减少毒副反应的发生,提升治疗效果。方法:数据来源:主要来源于2021年3月28日至2021年6月11日期间于上海市公共卫生临床中心在艾滋病自愿咨询检测门诊随访,并接受抗病毒治疗至少一周以上的中国成年艾滋病患者,其中服用DTG的患者270例（6例女性,264例男性）,服用TFV的患者165例（3例女性,162例男性）以及2例服用RAL的患者。另一部分来源于上海市公共卫生临床中心住院病房密集采样的艾滋病患者,其中服用DTG的患者9例（2例女性,7例男性）,服用TFV的患者30例（10例女性,20例男性）。详细记录患者的人口学资料、肝肾功能指标、服药时间和剂量、采血时间、合并用药等信息。每次采集4m L静脉血并分离血浆,血浆样品经过蛋白沉淀,DTG和RAL的样本以0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B）为流动相,采用Kinetex 2.6μm Phenyl-Hexyl（50×3.0 mm）色谱柱进行分离,TFV的样本以5 mmol/L甲酸铵溶液（A）-甲醇溶液（B）为流动相,采用Kinetex 2.6μm Phenyl-Hexyl（50×3.0mm）色谱柱进行分离,采用电喷雾电离源,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测。本研究采用非线性混合效应建模软件Monlix建立群体药动学模型,对DTG和TFV的体内药动学过程进行模型拟合,考察了人口学,肝肾功能指标及合并用药等因素的影响。采用了拟合优度图（Goodness of fit,GOF）,直观预测检测法（Visual predictive check,VPC）来评价最终模型的预测性和稳定性。结果:共纳入288个DTG的血药浓度点和555个TFV的血药浓度点。本研究建立了一种同时测定DTG和RAL血药浓度的LC-MS法,并建立了一种测定TFV血药浓度的LC-MS法,其中DTG离子对为420.3/277.1,RAL离子对为445.2/109.0,TFV离子对为288.0/176.1,血浆中DTG和RAL线性范围分别为25-5000 ng/m L,10-2000 ng/m L,TFV线性范围为1-200 ng/m L。DTG和RAL低浓度和高浓度质控样品的日内和日间精密度均在15%以内,提取回收率均大于90%。TFV的低浓度和高浓度质控样品的日内和日间精密度均小于15%,准确度在85%～115%范围内,低浓度和高浓度质控样品的提取回收率分别为114.36%和112.96%,基质效应为89.49%和89.60%。DTG最终模型采用一级吸收,一级消除的一房室模型,残差模型筛选结果显示:比例型拟合精度最优。DTG清除率（CL/F）的群体典型值为0.82 L/h,个体间变异为0.13。通过逐步回归法筛选协变量最终确定体重对DTG的CL/F有显著影响。最终模型的公式如下:CL/F（L/h）=0.82·（WT/67）0.37·（?）ηCLTFV最终模型采用一级吸收,一级消除的两房室模型,残差模型筛选结果显示:比例型拟合精度最优。TFV群体典型值CL/F为130.73L/h,V1/F为552.8L,Q/F为524.83 L/h,V2/F为2344.94L,Ka为1.7 h-1,。通过逐步回归法筛选协变量,发现肌酐清除率（Ccr）对TFV的CL/F有显著影响。最终模型的公式如下:CL/F（L/h）=130.73·（Ccr/117.3）0.7·（?）ηCLDTG和TFV的模型评价结果显示最终模型稳定可靠,拟合优度高,预测性能好。结论:本研究建立的同时定量DTG和RAL血药浓度的LC-MS方法及定量TFV血药浓度的LC-MS方法,灵敏度高、选择性强、具有良好的重现性。研究发现体重对DTG的清除率有显著影响,肌酐清除率对TFV的清除率有显著影响。本研究建立的群体药动学模型可以预测中国HIV感染者体内DTG和TFV的药代动力学行为,为临床个体化给药提供指导。