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目的:白血病是血液系统中常见的恶性肿瘤,发病原因复杂,分型多,治疗困难,预后差,常规化疗效果差,而且毒副作用大,患者常常因并发感染或出血导致早期死亡。因此白血病的治疗更需要一种缓解率高,毒副作用小的有效药物。蛇床子素是我国的传统中药蛇床子的提取物。具有解痉、抗炎等多种药理作用。并且近些年发现蛇床子素还具有通过诱导肿瘤细胞凋亡的抗肿瘤作用,已在多种实体瘤细胞株中得到证实,并对其凋亡机制做了部分研究,但针对血液系统肿瘤的研究较少,只有少数实验证明蛇床子素对HL-60细胞有抑制增殖作用,但其凋亡机制方面未见有文献报告,故本实验以此为基础,研究蛇床子素对白血病细胞的作用及作用机制,旨在发现一种效果好并且毒副作用小的新型白血病治疗药物,并为今后相关方面的研究提供理论依据。方法:取对数期生长的HL-60细胞建立蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡的模型,利用淋巴细胞分离液分离提取白血病病人人新鲜骨髓中的白血病细胞,CCK8方法检测细胞增殖情况,Hoechst33342染色观察细胞凋亡前后细胞核形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测细胞凋亡前后凋亡相关基因mRNA表达水平变化,蛋白质印记(Western bolt)方法检测凋亡相关蛋白表达变化,采用SPSS19.0进行统计学分析,测定数值用均数±标准差(ˉx±s)表示,t检验用于均数比较,不同组间比较采用单向方差分析,以p<0.05为具有统计学差异性。结果:CCK8实验测得蛇床子素对HL-60细胞株及人骨髓白血病细胞均有明显的增殖抑制作用(p<0.05),对人白血病抑制作用不及HL-60细胞明显,均具有剂量依赖性。倒置显微镜下可见药物作用后细胞出现凋亡小体等凋亡形态学改变,Hoechst33342染色亦可见诱导凋亡后的HL-60细胞核出现明显的凋亡形态学改变(固缩、边集、碎裂)。流式细胞术检测得到蛇床子素短时间即可诱导HL-60出现早期凋亡(p<0.05),RT-PCR实验发现,凋亡的HL-60细胞其Bax、Caspase3mRNA表达上调,Bcl-2mRNA表达下调Caspase9mRNA无明显改变。Western blot实验发现细胞相关凋亡蛋白,cleavedCaspase3、Caspase8、Caspase9、Fas、FasL、Bax目的蛋白表达增加,Bcl-2表达下降。上述改变均与细胞凋亡过程中的分子改变相符。结论:蛇床子素有抑制白血病细胞增殖并且诱导凋亡的作用,对HL-60细胞株及从人新鲜骨髓中分离得到的白血病细胞均有效,并且其在短时间内即可引起细胞凋亡,效果较强。已知细胞凋亡分为内源性途径(线粒体/细胞色素C介导的通路)和外源性途径(死亡受体通路),Bcl-2、Bax、Caspase9为细胞内源性凋亡途径的主要作用分子,外源性凋亡途径主要涉及Fas、FasL、Caspase8的分子表达改变。实验发现HL-60细胞凋亡过程中,出现明显的Bcl-2、Bax、Caspase9、Fas、FasL、Caspase8、Caspase3的mRNA及对应的蛋白分子表达变化与内、外源凋亡途径中的应出现的分子变化一致,可以推断蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡同时涉及外源性途径的激活和内源性途径的激活。