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目的:研究肝癌细胞旁分泌作用对激活型肝星状细胞LX-2增殖及胶原分泌的影响并初步探讨其机制。方法:培养人肝癌细胞系HepG2,收集第3天的条件培养基,将其按照不同比例:5%、10%、20%、40%加入至人激活型肝星状细胞系LX-2培养体系中进行培养;MTT比色法检测LX-2细胞增殖率;倒置显微镜观察LX-2细胞形态;Masson染色及天狼星红染色对细胞内胶原进行观察;检测LX-2细胞培养基中羟脯氨酸含量;免疫印迹法检测相关蛋白表达;酶联免疫吸附测定法检测条件培养基及LX-2细胞培养基中IL-6,TNF-α及TGF-β1分泌量。结果:(1)HepG2细胞条件培养基对LX-2细胞增殖能力的影响:随着条件培养基比例的增加,各浓度组LX-2细胞增殖率逐渐升高,并随时间逐渐增加,24h后40%条件培养基组LX-2细胞增殖率高于其他各组,有统计学意义(P<0.05);48h后,20%组及40%组LX-2细胞增殖率与对照组相比组间有统计学意义(P<0.05);72h后,20%组及40%组细胞增殖率与对照组、5%组及10%组相比组间均有统计学意义(P<0.05);倒置显微镜下可见72h后,对照组LX-2细胞分布稀疏,20%组及40%组LX-2细胞生长密集,并呈复层生长;(2)HepG2细胞条件培养基对LX-2细胞胶原合成及分泌的影响:Masson染色及天狼星红染色结果显示,加入不同比例条件培养基后,随着条件培养基比例的增加,LX-2细胞胞质中胶原着色增多;加入细胞条件培养基后LX-2细胞培养基中羟脯氨酸含量增高,呈时间及浓度依赖性(P<0.05),24h后40%组羟脯氨酸含量与其他各组相比组间有统计学意义(P<0.05),48h后20%组、40%组羟脯氨酸含量与其他各组相比均有组间有统计学意义(P<0.05),72h后条件培养基干预各组羟脯氨酸含量均高于对照组(P<0.05),40%组羟脯氨酸含量与其他各组相比组间有统计学意义(P<0.05),20%组羟脯氨酸含量与对照组、5%组及10%组相比组间有统计学意义(P<0.05);(3)HepG2细胞条件培养基促进LX-2细胞增殖与胶原分泌的分子机制探讨:肌成纤维细胞标志物Col-1和α-SMA的表达量在加入不同比例条件培养基后与对照组相比均出现上调(P<0.05);不同比例条件培养基处理组LX-2细胞的p-P38、p-AKT及BCL-2的表达水平与对照组相比上调,组间有统计学意义(P<0.05),P38、PI3K和BCL-2的表达在加入条件培养基后呈上升趋势,20%组及40%组与对照组相比组间有统计学意义(P<0.05);加入不同比例HepG2条件培养基后,LX-2细胞TGF-β1、TNF-α的分泌量与对照组相比组间有统计学意义(P<0.05),10%组、20%组、40%组IL-6分泌量与对照组相比组间有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)人肝癌细胞HepG2旁分泌作用可促进人激活型肝星状细胞LX-2增殖及胶原过度分泌;(2)人肝癌细胞HepG2旁分泌作用促进人激活型肝星状细胞LX-2增殖、胶原过度分泌的机制可能与HepG2细胞旁分泌细胞因子如TGF-β1、TNF-α及IL-6激活LX-2细胞中的TGF-β/Smad3通路、P38 MAPK通路及PI3K/AKT通路有关。