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背景:晚期糖基化终末产物（AGEs）是机体代谢物与还原糖在糖基化反应下产生的复杂化合物。在机体衰老或血糖升高的过程中,AGEs在体内不断合成并积累,进而导致一些慢性退行性疾病的发生。研究显示,AGEs会加重糖尿病性牙周炎、种植体周围炎等口腔疾病的发展,破坏牙周局部组织的免疫调节平衡,最终导致严重骨吸收的发生。而巨噬细胞作为固有免疫的重要组成部分,可极化为经典M1型或替代M2型以响应局部微环境的变化。巨噬细胞极化也被证明是牙周炎、正畸牙移动、种植体周围炎等环境中的关键免疫调节机制。因此,探究AGEs对巨噬细胞极化的作用,可能是阐明AGEs介导下相关炎症及骨吸收疾病发病机制的新方向。Notch信号通路被认为是巨噬细胞极化的调节机制之一,而AGEs是否能激活巨噬细胞中的Notch信号传导尚不清楚。揭示Notch信号通路在AGEs介导的巨噬细胞极化中的作用及机制,可能为防治上述疾病的发生发展提供理论依据。目的:本研究旨在阐明AGEs对巨噬细胞极化的影响,并尝试探索Notch信号通路在其中的作用,为AGEs引起的相关炎症及骨吸收疾病提供理论依据。方法:第一部分:CCK-8及凋亡检测筛选出对RAW264.7巨噬细胞无毒性的AGEs浓度;Griess法、q RT-PCR、Western blot、流式细胞术等方法检测AGEs作用下的巨噬细胞极化。第二部分:q RT-PCR及Western blot检测AGEs对Notch信号通路的激活;构建并转染NICD1过表达质粒、靶向抑制Notch1的sh RNA、靶向沉默RBP-J的si RNA,以及应用Notch通路抑制剂DAPT干预巨噬细胞;q RT-PCR及Western blot检测各种方法对Notch信号通路的干预效果,并揭示干预Notch信号通路对AGEs介导的巨噬细胞极化的影响。结果:第一部分:AGEs浓度为100mg/L时对细胞活力无明显影响,并以此浓度开展后续研究;AGEs增加了巨噬细胞的NO释放量,上调了M1相关标志i NOS、IL-6、IL-12b、CD86的m RNA表达及i NOS的蛋白表达,下调了M2相关标志IL-10的m RNA表达;流式细胞术检测结果显示AGEs促进了M1标志抗原CD86的表达,抑制了M2标志抗原CD206的表达。第二部分:AGEs上调了Notch信号通路相关标志如Jagged1、Notch1、RBP-J、Hey1的m RNA表达,促进了细胞总Notch1蛋白的表达及胞核内NICD1蛋白的表达;成功构建并转染NICD1过表达质粒、sh-Notch1质粒、si-RBP-J及相应阴性对照载体;过表达NICD1后,AGEs作用下上调的M1相关标志的表达进一步升高;sh RNA抑制Notch1表达后,AGEs作用下上调的M1相关标志的表达水平出现降低;DAPT干预Notch信号传导后,AGEs引起的M1相关标志的高表达被显著逆转;si RNA沉默RBP-J表达后,AGEs介导的M1极化也被显著缓解。结论:第一部分:AGEs促进巨噬细胞M1极化,抑制M2极化。第二部分:AGEs激活巨噬细胞中的Notch信号通路,促进NICD1的核转运;Notch信号通路参与调控AGEs介导的巨噬细胞M1极化,靶向抑制Notch信号通路可能是防治由AGEs引起的相关炎症及骨吸收疾病的思路之一。