【摘 要】
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目的本研究的目的是以移植瘤为模型,探讨Sorcin如何调控CD8+T细胞免疫记忆,为临床肿瘤的免疫治疗提供新的靶点。方法流式细胞仪检测C57BL/6（WT）和Sorcin-/-小鼠CD8+T细胞表型:包括活化、增殖、凋亡、T细胞记忆等;皮下移植瘤动物模型分组:实验组:6-8周Sorcin-/-小鼠、对照组:6-8周C57BL/6小鼠。将Sorcin-/-小鼠与WT小鼠皮下注射低浓度MC-38（小鼠
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目的本研究的目的是以移植瘤为模型,探讨Sorcin如何调控CD8+T细胞免疫记忆,为临床肿瘤的免疫治疗提供新的靶点。方法流式细胞仪检测C57BL/6（WT）和Sorcin-/-小鼠CD8+T细胞表型:包括活化、增殖、凋亡、T细胞记忆等;皮下移植瘤动物模型分组:实验组:6-8周Sorcin-/-小鼠、对照组:6-8周C57BL/6小鼠。将Sorcin-/-小鼠与WT小鼠皮下注射低浓度MC-38（小鼠结肠癌细胞）,造模30天后,Sorcin-/-小鼠和WT小鼠皮下注射高浓度的MC-38细胞,持续观察记录两种小鼠肿瘤的大小,并绘制生长曲线,待体积超过1500时,解剖分离出肿瘤,称量小鼠肿瘤重量并绘制曲线;免疫蛋白印迹鉴定Sorcin-/-。RNA测序分析WT和Sorcin-/-小鼠的差异基因表达。结果1、Western Blot显影结果显示野生型小鼠组织可以检测到Sorcin蛋白的表达,基因敲除小鼠组织中检测不到Sorcin蛋白的表达。2、PCR扩增出Sorcin基因的内含子和标记基因neomycin,2%琼脂糖电泳显示,WT小鼠可以扩增出Sorcin基因,但扩增不出标记基因neomycin,Sorcin-/-基因敲除小鼠可以扩增出标记基因neomycin,但扩增不出Sorcin基因。3、流式细胞术发现两组小鼠在CD8T细胞的活化及增殖方面没有显著差别。4、流式细胞术检测Sorcin-/-组及对照组CD8+T细胞的凋亡率发现两者无显著差别。5、流式细胞术表明WT小鼠和Sorcin-/-小鼠在CD4及CD8比例上无差异,然而两组小鼠CD62LhighCD44high阳性中枢记忆型CD8+T比例存在明显差异。6、皮下移植瘤模型中,Sorcin-/-组比较对照组小鼠在经过初次注射后,当再次注射后出现了抑制肿瘤生长的现象。7、分选WT和Sorcin小鼠的CD8T细胞,体外经CD3和CD28抗体包活化24小时后,进行RNA测序,找到了实验组与对照组之间的差异表达基因,分别富集到生理和病理的过程。结论Sorcin调控中枢记忆型CD8+T细胞形成。当再次接种肿瘤细胞时,与野生型小鼠相比,Sorcin敲除小鼠产生更好的抗肿瘤效应。这也为临床肿瘤的免疫治疗提供新的靶点。
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