【摘 要】
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木聚糖酶在造纸制浆、纺织、饲料、酿酒、果汁生产中具有广阔的应用前景。在造纸工业,木聚糖酶可以提高纸张的白度和强度,减少氯的用量,降低生产成本,减轻对环境的污染;在饲料行业,木聚糖酶可缓解木聚糖在饲料中的抗营养作用,促进双歧杆菌的繁殖,抑制腐败菌的增生,促进矿物质的吸收,增强免疫功能;在食品工业,木聚糖酶加工面包食品,可以改善面包的质地、结构和松软度。另外,木聚糖酶还可应用于酿造行业,甚至有报道木聚
【基金项目】
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国家自然科学;湖北省自然科学;科学院知识创新工程重大项目;;
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木聚糖酶在造纸制浆、纺织、饲料、酿酒、果汁生产中具有广阔的应用前景。在造纸工业,木聚糖酶可以提高纸张的白度和强度,减少氯的用量,降低生产成本,减轻对环境的污染;在饲料行业,木聚糖酶可缓解木聚糖在饲料中的抗营养作用,促进双歧杆菌的繁殖,抑制腐败菌的增生,促进矿物质的吸收,增强免疫功能;在食品工业,木聚糖酶加工面包食品,可以改善面包的质地、结构和松软度。另外,木聚糖酶还可应用于酿造行业,甚至有报道木聚糖酶可以用来生产生物燃料,缓解能源紧张的问题。目前,很多木聚糖酶基因已被克隆并且实现了重组表达,并解析了其三维晶体结构。但是交链孢Alternaria sp.的木聚糖酶尚未有人研究,但作为一个植物病原菌,能侵入植物组织,一定能产生木质纤维素降解酶,本研究前期克隆了交链孢的木聚糖酶基因xyn186,是第一个从Alternaria属克隆得到的木聚糖酶基因,利用基因自身信号肽在毕赤酵母中进行异源表达,初步研究了粗酶液的性质。本实验对Alternaria sp. HB186来源的这个新木聚糖酶基因xyn186进行了序列分析。该基因含有一个696bp的开放阅读框,编码19个氨基酸的信号肽和213个氨基酸的11家族糖基水解酶。XYN186具有11家族糖基水解酶的两个高度保守的催化氨基酸残基(E106,E197),含有两个潜在N-糖基化位点,和Aspergillus niger来源地木聚糖酶B相似度为60%,将获得的编码成熟肽的cDNA克隆进pHBM905A载体转入毕赤酵母GS115进行表达,转化子在含交联木聚糖的平板进行筛选。挑选水解圈较大的重组子进行诱导表达,表达酶液经过纯化后,进行SDS-PAGE检测,结果显示,该酶的分子量为23kDa,未被糖基化。酶学性质研究显示,该酶的最适温度是50℃,最适pH为6,在4.5-6.5有80%以上的活性,是个酸性木聚糖酶。XYN186的比酶活为81.56U·mg-1, Km和Vmax分别为1.404mg-ml-1和0.2748mmol·min-1·mg-1。酶在40℃具有良好的热稳定性,但是在50℃处理15min几乎完全丧失活性。Cu2+和Hg2+几乎完全抑制了酶的活性,其它实验的金属离子对酶的活性影响不大。通过Realtime-PCR检测到所得重组菌株整合了两个拷贝的木聚糖酶基因xyn186。
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