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目的在我国,膀胱癌是发病率最高的泌尿系统的恶性肿瘤。近年来,膀胱癌的发生率呈现逐年增高的趋势。临床上表阿霉素是常用的膀胱癌灌注治疗药物,但其刺激性强,组织亲和性与通透性高,存在膀胱上皮刺激与血浆暴露风险,产生毒副作用大进而影响临床治疗。制备具有降低临床毒副作用的p H敏感型羟乙基淀粉-表阿霉素（HES-EPI）及叶酸主动靶向的羟乙基淀粉-表阿霉素（FA-HES-EPI）前药胶束,并对前药胶束进行体内外评价。方法为了增加药物在肿瘤部位的浓度,提高治疗效果,构建具有p H敏感、叶酸靶向功能的羟乙基淀粉-表阿霉素前药胶束:将EPI以亚胺键或腙键与醛基化羟乙基淀粉（HES-CHO）结合,叶酸（FA）与醛基化羟乙基淀粉以酯键结合,两亲性前药通过纳米沉淀法自组装形成胶束,并对其粒径、形貌、体外释放行为进行考察。以SD大鼠原位膀胱癌模型的构建采用N-甲基-N-亚硝基脲（N-methyl-N-nitrosourea,MNU）膀胱灌注诱导法建立动物模型,进行体内刺激性、血浆暴露、组织分布、抗肿瘤疗效、组织病理学分析评价,以及细胞实验验证所构建的羟乙基淀粉表阿霉素前药胶束的抗膀胱癌效果。结果采用动态光散射法测定载药胶束的粒径及电位,HES-EPI亚胺键前药胶束的平均粒径为124.30±0.30 nm,PDI为0.255±0.008,平均电位为-25.80±2.40 m V。HES-EPI腙键前药胶束的平均粒径为163.30±0.50 nm,PDI为0.202±0.012,平均电位为-0.33±0.16 m V。FA-HES-EPI亚胺键前药胶束的平均粒径为136.90±0.89 nm,PDI为0.264±0.097,平均电位为-9.07±0.67 m V。FA-HES-EPI腙键前药胶束的平均粒径为136.40±0.95 nm,PDI为0.183±0.023,平均电位为-0.24±0.26 m V。透射电镜（TEM）观察前药胶束形貌大小均一呈类球形,并通过监测室温下胶束粒径及载药量的变化,认为前药胶束物理稳定性良好。前药胶束体外释放行为呈现释放缓慢且具有一定的酸敏感性。组织HE染色切片结果显示与EPI·HCl相比前药胶束具有更低刺激性。根据膀胱灌注所得药时曲线计算EPI·HCl组Cmax为98.40±4.13 ng·m L-1,AUC0-t为70.56 ng·m L-1·h-1,HES-EPI亚胺键组Cmax为72.27±4.92ng·m L-1,AUC0-t为20.09 ng·m L-1·h-1,HES-EPI腙键组Cmax为44.07±6.25 ng·m L-1,AUC0-t为8.48 ng·m L-1·h-1,说明灌注药物后以及药物排出体外后,EPI·HCl组血浆药物浓度均明显高于前药胶束组,证实了与EPI·HCl相比前药胶束具有更低的血浆暴露。利用EPI的自发荧光,离体肿瘤荧光成像结果表明前药胶束在肿瘤组织特异性蓄积;另外通过测定EPI HCl组、HES-EPI腙键组与FA-HES-EPI腙键组膀胱的肿瘤组织和正常组织的药物含量,说明了该主动靶向系统显著改善了药物在体内的组织分布,实现药物浓度在肿瘤部位的增加与健康器官的降低。通过评估膀胱内外表面的肿瘤生长抑制直观地证实了前药胶束的优秀抗肿瘤作用。叶酸主动靶向FA-HES-EPI前药胶束组膀胱组织未见明显肿瘤,表面光滑,大小正常,形态正常,并且主动靶向FA-HES-EPI腙键这组肿瘤质量最低为0.26 mg。通过测量体重发现,在治疗结束时,游离EPI·HCl组的大鼠体重相比治疗前下降了22.9%。在整个化疗过程中HES-EPI亚胺键和腙键前药胶束组没有显示出明显的体重减轻,叶酸主动靶向FA-HES-EPI亚胺键和腙键前药胶束组治疗的实验动物在治疗期间体重稳定增加,在治疗结束后,其体重比治疗开始时均增加了0.45%,表明其全身毒性可忽略不计。降低的全身毒性说明该前药胶束具有可靠的生物安全性。组织病理学HE切片结果与体内抗肿瘤的结果一致,与对照组正常膀胱组织细胞相比,观察到游离药组有大量癌细胞,结构紊乱,核异型性明显,出现有球形或梭形细胞核以及增大的细胞核或异质双核仁,提示仍有膀胱肿瘤组织的存在。所有的前药胶束治疗组相较于游离药组而言,肿瘤细胞数均明显减少。其中叶酸主动靶向FA-HES-EPI前药胶束明显比HES-EPI前药胶束的肿瘤细胞数更少,同时腙键键合的前药胶束组与亚胺键键合的前药胶束组相比更少表现出增大的细胞核或异质双核仁的肿瘤细胞。同时用TUNEL法检测凋亡DNA片段,主动靶向FA-HES-EPI前药胶束组中检测到绿色颗粒的数量最多,表明其中细胞凋亡的程度最大。共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）和流式细胞仪（FCM）检测细胞摄取能力均是靶向的FA-HES-EPI组的始终比非靶向的HES-EPI组的能力强,并且随着叶酸比例的提高,这种差距逐渐加大。表明叶酸含量的增加有望增加肿瘤细胞对药物的摄取能力,从而增强叶酸键合前药胶束对膀胱癌的靶向治疗效果,以上结果均揭示了叶酸主动靶向前药胶束具有更好的抑制肿瘤生长的效果。结论本文通过p H敏感亚胺键或腙键偶联羟乙基淀粉（HES）和化疗药物表阿霉素（EPI）,自组装形成纳米胶束。提高药物稳定性,延缓药物释放,增加药物在肿瘤部位的浓度,降低毒性,提高药物的治疗指数。为了进一步增加抗肿瘤效果,将叶酸修饰至胶束表面,赋予其主动靶向能力。由于叶酸特异性受体在肿瘤上的高度表达促进药物蓄积,与未修饰的前药胶束相比,叶酸修饰使胶束的肿瘤靶向性进一步增加,对癌细胞的杀伤能力更强,对正常组织的毒性降低。综上所述,该胶束基于了靶向递送,精准释药的策略,有望提高表阿霉素在膀胱癌治疗中的临床价值。该论文有图24幅,表9个,参考文献74篇。