第一部分腹膜间皮细胞表达βig-h3与胃癌病理及腹膜转移相关因素的关系　　 目的：　　 探讨胃癌患者腹膜间皮细胞中βig-h3表达与胃癌生物学行为及腹膜转移相关因素的关系。　　 材料与方法：　　 一、研究对象　　 病例来源于2011年5月-9月间中国医科大学附属第一医院肿瘤外科胃癌手术病例75例，其中男性51例，女性24例；平均年龄61岁(32-81岁)。另收集14例同期胃良性病变标本作为对照。　　 二、实验方法　　 (一)取材手术开腹后，留取腹腔冲洗液，取部分腹腔液行细胞学检查(Peritoneal lavage Cytology，PLC)；其余冲洗液沉渣提取总RNA深低温冰箱冻存，择期行RT-PCR检测腹腔液中CEA mRNA。腹膜组织取自前下方腹壁，并立刻固定于10％的甲醛溶液，石蜡包埋、切片(5μm)，择期行免疫组织化学染色。　　 (二)结果分析按同本胃癌病理规约标准判定病理因素。根据胃癌腹腔冲洗液PLC检查结果分组为：PLC(-)组、PLC(+)组。排除非特异性染色的前提下，以腹膜间皮细胞胞质内出现黄色、棕黄色、浅褐色颗粒为阳性标记。PCR扩增后产物经含EB染色剂的2%琼脂糖凝胶电泳，以199bp出现阳性条带为CEA mRNA阳性。　　 三、统计学分析　　 实验数据应用SpSS16.0统计软件包进行分析。各组间指标比较用x2检验，P<0.05为差异有统计学意义。　　 结果：　　 一、胃癌和良性疾病对照组腹膜组织βig-h3免疫组化染色结果　　 75例胃癌患者中，29例腹膜组织βig-h3免疫组化染色结果呈阳性，46例呈阴性。14例胃良性疾病患者中，1例呈阳性。胃癌组阳性比率明显高于良性疾病组，差异具有统计学意义(p=0.030)。　　 二、腹膜组织βig-h3免疫组化染色结果与胃癌病理生物学行为的关系　　 腹膜组织免疫组化阳性率在未分化、弥漫状生长、淋巴结转移阳性的胃癌中升高，但差异不具有统计学意义；在浸透浆膜(T4)(p=0.016)、浆膜呈腱状及多彩弥漫型组(p=0.037)中明显升高，差异具有统计学意义。　　 三、腹膜组织βig-h3免疫组化染色结果与肉眼腹膜转移、PLC检查及CEA mRNA结果的关系　　 75例胃癌病例中，13例伴有肉眼腹膜转移，20例腹腔脱落癌细胞呈阳性；32例CEA mRNA结果阳性。βig-h3表达阳性率在肉眼腹膜转移阳性(p=0.002)、腹腔脱落癌细胞阳性(p=0.005)及CEA mRNA阳性组(p=0.027)明显升高，差异具有统计学意义。　　 结论：　　 (1)胃癌患者腹膜间皮细胞可表达细胞外基质蛋白βig-h3。　　 (2)胃癌患者腹膜间皮细胞中βig-h3的表达量，随胃癌病期进展而增加。　　 (3)胃癌患者腹膜间皮细胞中βig-h3的表达量与多种胃癌腹膜转移相关因素密切相关，可成为预测胃癌腹膜转移的指标之一。　　 第二部分胃癌细胞上清及转化生长因子-β1促进腹膜间皮细胞βig-h3蛋白的表达　　 目的：　　 研究胃癌细胞SGC-7901上清及转化生长因子-β1(TGF-β1)可否促进人类腹膜间皮细胞表达βig-h3蛋白。　　 材料与方法：　　 一、材料　　 胎牛血清(FBS)、RPMI1640和DMEM培养基、重组人TGF-β1：人类腹膜间皮细胞系HMrSV5；胃癌细胞系SGC-7901；Anti-βig-h3抗体和βig-h3 ELISA试剂盒；辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG；超速离心机4K15；二氧化碳培养箱。　　 二、方法　　 培养胃癌细胞SGC-7901，第3天培养液上清与DMEM培养液1:4混合液及0，1.0，10.0，50.0ng/ml TGF-β1分别刺激人类腹膜间皮细胞HMrSV50、3、6、12、24小时，ELISA方法检测上清液中βig-h3蛋白浓度，Western-blot检测细胞内βig-h3蛋白浓度。　　 三、统计学处理　　 所有数据以均数±标准差(X-±S)表示，应用SPSS13.0统计软件包进行分析。各组间指标比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。　　 结果：　　 一、TGF-β1对腹膜间皮细胞培养液及细胞内表达βig-h3水平的影响。　　 正常对照组细胞上清液中有基础量的βig-h3蛋白分泌，TGF-β1可刺激腹膜间皮细胞分泌βig-h3，且呈时间及浓度依赖性。TGF-β1增加腹膜间皮细胞内βig-h3蛋白量，并呈时间及浓度依赖性。　　 二、胃癌细胞上清刺激对闻皮细胞培养液中βig-h3及间皮细胞内表达βig-h3水平的影响。　　 胃癌细胞上清刺激间皮细胞，培养液中βig-h3于24小时可获得最大浓度。腹膜间皮细胞内βig-h3表达含量于12小时达到高峰。　　 结论：　　 (1)正常腹膜间皮细胞可表达、分泌细胞外基质蛋白βig-h3。　　 (2)胃癌细胞上清及TGF-β1可促进腹膜间皮细胞可表达、分泌细胞外基质蛋白βig-h3　　 (3)胃癌细胞上清及TGF-β1的促进作用呈浓度及时间依赖性增加。　　 第三部分细胞外基质蛋白βig-h3诱导胃癌细胞SGC-7901粘附、增殖及迁移　　 目的：　　 研究细胞外基质蛋白βig-h3可否诱导胃癌细胞SGC-7901粘附、迁移及增殖。　　 材料与方法：　　 一、材料　　 胎牛血清(FBS)、RPMI1640培养基、重组人βig-h3蛋白及四甲基偶氮唑蓝(MTT)、纤维粘连蛋白(FN)、Transwell小室、胃癌细胞系SGC-7901、超速离心机4K15、二氧化碳培养箱。　　 二、方法　　 (一)MTT法检测SGC7901细胞与βig-h3的粘附及增殖程度　　 胎牛血清(BSA)、纤维粘连蛋白(FN)及细胞外基质蛋白βig-h3包被96孔板后，对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901接种于96孔细胞培养板内。应用MTT法检测其与βig-h3粘附能力及粘附后的增殖能力　　 (二)Transwell小室侵袭实验检测βig-h3诱导SGC7901细胞迁移的能力　　 在Transwell小室滤膜下表面覆以人重组βig-h3、BSA及FN包被，上室加入SGC-7901细胞悬液。37℃培养24小时，清洗，0.1%结晶紫染色10 min。光镜下观察记录膜背面侵袭的细胞数。　　 三、统计学处理　　 所有数据以均数±标准差(X±S)表示，应用SPSS16.0统计软件包进行分析。各组间指标比较用方差分析或t检验，P<0.05为差异有统计学意义。　　 结果　　 一、βig-h3支持SGC-7901细胞的粘附及增殖　　 SGC-7901细胞对βig-h3和FN的粘附能力明显高于BSA，差异具有统计学意义(P=0.023)；βig-h3和FN两组间差异不明显(P>0.05)。BSA、FN和βig-h3促进SGC-7901细胞增殖的能力渐次增强，差异具有统计学意义(P=0.031)。　　 二、βig-h3诱导SGC-7901细胞的迁移　　 Transwell小室侵袭实验证实：βig-h3和FN具有更强的诱导SGC-7901细胞迁移的能力，差异具有统计学意义(P=0.019)。Big-h3和FN两组之间无显著差异(P>0.05)。　　 结论：　　 (1)βig-h3可诱导细胞粘附，其诱导作用明显高于BSA。　　 (2)BSA、FN和βig-h3可促进胃癌细胞增殖，其诱导能力渐次增强。　　 (3)βig-h3可诱导细胞迁移，其诱导作用与FN相仿，明显高于BSA。