随着世界范围内人类预期寿命的延长和人口老龄化速度的加快,脑血管病发病率和患病率有呈逐年增高的趋势。这其中缺血性脑血管病(ischemiccerebrovascular diseases,ICVD)占到70％。脑缺血后,尽快的恢复缺血区的脑血液灌注以求挽救和保护神经细胞应该是理所当然的,但是,在很多情况下缺血后再灌注不仅没有使神经功能得到恢复,反而使缺血所致的功能障碍和组织结构破坏进一步加重,这种现象就是缺血再灌注损伤(ischemia reperfusioninjury,CIRI)。到目前为止,尚无一种公认的疗效确切且无副作用的药物能够对抗脑缺血再灌注损伤。　　 神经流行病学研究结果表明,脑卒中发病率与死亡率绝大多数为男性高于女性。研究显示女性在绝经期前的卒中发生率比同年龄男性要低,而绝经期后女性的卒中发生率则明显升高。已有大量的实验结果证明:雌二醇处理能明显降低脑缺血再灌注损伤引起的神经元的死亡。也有大量的研究表明,在脑外伤模型中,黄体酮能够抑制炎症介质的表达,从而发挥神经保护作用,并且已经完成临床二期试验。虽然目前关于黄体酮对缺血性脑损伤的保护作用已有文献报道,但是有关黄体酮对脑缺血再灌注损伤的预防和保护作用机制还鲜有研究。所以,本研究旨在通过用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,在动物整体、细胞、分子以及基因等四个层面探讨黄体酮对脑缺血再灌注损伤时神经元保护作用的机制,为黄体酮防治缺血性脑血管病提供理论依据。　　 第一部分、黄体酮减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤　　 目的:建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,通过动物实验观察黄体酮的神经保护作用。　　 方法:成年雄性SD大鼠,体重250～300 g。随机分为假手术组(Control)、模型组(I/R)、溶剂组(Vehicle)和黄体酮组(PROG)。每组按再灌注时间再分设4个亚组。通过线栓法制作MCAO大鼠模型。将黄体酮溶于2-羟丙基β-环糊精(2-HBC)中,黄体酮组于术前7 d开始腹腔注射黄体酮(10mg/kg)1次/d;溶剂组给予等体积的2-羟丙基β-环糊精溶液。4组大鼠分别于缺血2h再灌注后不同时间点进行神经功能评分测定、脑梗死体积测定和病理学检查。　　 结果:假手术组大鼠均无神经功能缺失症状。模型组、溶剂组和黄体酮组大鼠术后均出现神经功能缺失症状。黄体酮组大鼠神经功能明显改善(P＜0.05);各时间点黄体酮组大鼠的梗死体积均较模型组缩小(P＜0.05)。光镜下可见假手术组无梗死灶,黄体酮组脑组织病理损害明显减轻。　　 结论:黄体酮能显著改善脑缺血/再灌注损伤后大鼠神经功能和脑组织病理变化,缩小脑梗死体积,对脑缺血再灌注损伤具有明显的神经保护作用。　　 第二部分、黄体酮对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织SOD活性及MDA、Glu、Ca2+、TNF-α、IL-1β含量的影响　　 目的:观察黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后兴奋性氨基酸、自由基和脂质过氧化、Ca2+超载和炎症反应的影响,探讨其脑保护作用机制。　　 方法:成年雄性SD大鼠,体重250～300 g。随机分为假手术组(control)、模型组(I/R)、溶剂组(Vehicle)和黄体酮组(PROG)。每组按再灌注时间再分设4亚组。通过线栓法制作MCAO大鼠模型。将黄体酮溶于2-羟丙基β-环糊精(2-HBC)中,黄体酮组于术前7 d开始腹腔注射黄体酮(10mg/kg)1次/d;溶剂组给予等体积的2-羟丙基β-环糊精溶液。4组大鼠分别于缺血2h再灌注后不同时间点采用分光光度法测定Glu和钙含量;采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性;采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量;放射免疫法测定TNF-α、IL-1β的含量。　　 结果:与模型组比较,黄体酮组脑组织的Glu、MDA和钙含量在各个时间点均显著降低(P＜0.05);脑组织的SOD活性均有不同程度升高(P＜0.05);脑组织TNF-α、IL-β的含量在各个时间点均显著降低(P＜0.05)。　　 结论:黄体酮能够在脑缺血再灌注时减轻自由基氧化作用、抑制脂质过氧化反应、防止钙超载、降低谷氨酸含量、抑制炎症因子的表达及其活性,这揭示出黄体酮很有可能作用于脑缺血再灌注损伤的各个环节,从而发挥脑保护作用。　　 第三部分、黄体酮对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织NGF、GDNF表达的影响　　 目的:观察黄体酮对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后梗死侧皮层NGF和GDNF在mRNA与蛋白质水平表达的影响,探讨黄体酮在脑缺血.再灌注损伤中的脑保护作用机制。　　 方法:成年雄性SD大鼠,体重250～300 g。随机分为假手术组(Control)、模型组(I/R)、溶剂组(Vehicle)和黄体酮组(PROG)。每组按再灌注时间再分设4亚组。通过线栓法制作MCAO大鼠模型。将黄体酮溶于2-羟丙基β-环糊精(2-HBC)中,黄体酮组于术前7 d开始腹腔注射黄体酮(10mg/kg)1次/d;溶剂组给予等体积的2-羟丙基β-环糊精溶液。4组大鼠分别于缺血2h再灌注后不同时间点应用应用实时荧光定量PCR(Real time PCR)和蛋白印迹(Western blot)技术检测NGF和GDNF在mRNA与蛋白质水平的表达情况。　　 结果:再灌注3h时黄体酮组大鼠梗死侧皮层NGF及其mRNA的表达开始升高;6h时模型组与溶剂组大鼠梗死侧皮层NGF及其mRNA的表达开始升高,至24h回落到假手术组水平;黄体酮组大鼠梗死侧皮层NGF及其mRNA表达在再灌注12h达高峰,差异有显著性(P＜0.05),至24h时表达仍高(P＜0.05)。再灌注6h时模型组与溶剂组大鼠脑部GDNF及其mRNA的表达开始逐渐升高,至24h达高峰;黄体酮组大鼠脑部GDNF及其mRNA表达在再灌注3h时开始逐渐升高,在12h时明显高于模型组与溶剂组(P＜0.05),至24h时达高峰(P＜0.05)。　　 结论:黄体酮可以使脑缺血-再灌注损伤后NGF和GDNF的mRNA表达上调,促进脑内NGF和GDNF蛋白的合成,从而发挥脑保护作用。　　 第四部分、黄体酮对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡和相关基因gaspase-3、bcl-表达的影响　　 目的:采用线栓法制备大鼠MCAO模型,观察黄体酮对脑缺血再灌注后神经元凋亡和相关基因caspase-3、bcl-2表达的影响,探讨黄体酮对脑缺血后神经元保护作用的机制,为临床应用提供依据。　　 方法:成年雄性SD大鼠,体重250～300 g。随机分为假手术组(control)、模型组(I瓜)、溶剂组(Vehicle)和黄体酮组(PROG)。每组按再灌注时间再分设4亚组。通过线栓法制作MCAO大鼠模型。将黄体酮溶于2-羟丙基β环糊精(2-HBC)中,黄体酮组于术前7 d开始腹腔注射黄体酮(10mg/kg)1次/d;溶剂组给予等体积的2-羟丙基β-环糊精溶液。4组大鼠分别于缺血2h再灌注后不同时间点采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)测定神经元凋亡,应用实时荧光定量PCR(Real time PCR)和蛋白印迹(Western blot)技术检测caspase-3、bcl-2mRNA及其蛋白的表达情况。　　 结果:在损伤区皮层,黄体酮组caspase-3及其mRNA在3 h与模型组无显著差异,但在6 h、12 h、24 h时均明显低于模型组与溶剂组(P＜0.05);黄体酮组bcl-2及其mRNA表达在12 h和24 h时明显高于模型组与溶剂组(P＜0.05);TUNEL阳性细胞数在各时间点均明显减少(P＜0.05)。　　 结论:在大鼠脑缺血再灌注后,黄体酮可通过增加梗死侧皮层bcl-2的表达、减少Caspase-3的表达、减少神经元的凋亡数量,从而发挥脑保护作用。