论文部分内容阅读
背景:糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是全世界终末期肾病的首要病因,与心血管事件和死亡相关。DN的发病机制非常复杂,迄今为止还没有完全阐明。大量研究表明遗传因素和碳水化合物代谢异常是DN形成的主要原因。流行病学调查结果和家族聚集性研究也显示遗传易感性影响DN的发病。最近,骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)基因已经被证明是印度人2型糖尿病合并DN的一个新的候选基因。中国人作为DN的高发人群,OPN基因单核苷酸多态性(Single-nucleotide polymorphism,SNP)与DN的相关性如何尚不清楚。目的:1.研究OPN基因启动子的3个SNP位点rs11730582(C-443T),rs11439060(del G-156G),rs28357094(G-66T)在湖北地区汉族居民2型糖尿病患者中的等位基因频率和基因型频率的分布。2.研究OPN基因启动子的3个SNP位点rs11730582(C-443T),rs11439060(del G-156G),rs28357094(G-66T)与湖北地区汉族居民2型糖尿病合并DN的易感性的关系,为DN的早期预警提供有力的工具。方法:以2015年7月-2016年3月于长江大学附属第一医院内分泌科住院的2型糖尿病患者600名作为研究对象。根据尿白蛋白排泄率(Urinary albumin excretion rate,UAER)或尿白蛋白肌酐比值(Albumin-creatinine ratio,ACR)将研究对象分为2组。2型糖尿病肾病组(病例组):3次UAER中有2次≥30 mg/24h或尿ACR≥30μg/mg,共纳入334例,男性179例,女性155例,平均年龄60.61±12.16岁;2型糖尿病非肾病组(对照组):3次UAER<30mg/24h或尿ACR<30μg/mg,共纳入266例,男性136例,女性130例,平均年龄59.36±10.43岁。以印度研究的3个OPN基因启动子SNP位点rs11730582(C-443T),rs11439060(del G-156G),rs28357094(G-66T)作为候选基因位点。应用单碱基延伸或其修饰形式与基质辅助激光吸收/离子飞行时间质谱相结合的SNP检测方法对这些SNP位点进行基因分型。对两组各项临床变量、各等位基因频率、基因频率、连锁不平和和基于多位点的单体型结构与频率进行比较分析,使用SPSS 20.0 for Windows统计软件对各项临床变量进行统计学分析,使用SHEsis软件通过最大化似然算法对Hardy-Weinberg平衡的符合程度、各等位基因频率、基因型频率、连锁不平衡、单体型结构与频率进行分析。结果:1.两组有相似的年龄、性别、糖尿病家族史、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、总胆固醇、体质指数、ACEI/ARB使用率和胰岛素使用率(P>0.05)。与对照组比较,病例组的糖尿病病程更长,肌酐、甘油三酯、收缩压和舒张压更高,DR和高血压患病率更高,具有统计学意义(P<0.05)。2.位点rs11730582(C-443T)在对照组和病例组中的最小等位基因频率(MAF)分别是C=0.33和C=0.31;位点rs11439060(del G-156G)在对照组和病例组中的MAF分别是G=0.42和G=0.39;位点rs28357094(G-66T)在对照组和病例组中均表现为纯合子TT,不具有多态性。位点rs11730582(C-443T)和rs11439060(del G-156G)在对照组和病例组中基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),可以认为它们具有群体代表性。位点rs11730582(C-443T)和rs11439060(del G-156G)的等位基因频率和基因型频率在对照组和病例组之间的差异比较均无统计学意义(P>0.05)。3.使用SHEsis软件对符合Hardy-Weinberg平衡的2个位点(rs11730582和rs11439060)进行两两连锁不平衡分析,结果表现出较强的连锁不平衡。使用SHEsis软件进行单体型分析,以频率>0.03为准,发现3种单体型,以T-G为主,C-del G次之,T-del G最少。这3种单体型在对照组和病例组之间的差异比较都没有统计学意义(P>0.05)。结论:1.湖北地区汉族居民OPN基因启动子SNP位点rs11730582(C-443T)和rs11439060(del G-156G)存在基因多态性。2.湖北地区汉族居民OPN基因启动子SNP位点rs28357094(G-66T)仅有纯合子TT,不具有基因多态性。3.位点rs11730582(C-443T)和rs11439060(del G-156G)的等位基因频率和基因型频率在对照组和病例组之间的差异比较均无统计学意义,位点rs11730582(C-443T)和rs11439060(del G-156G)构成了3种单体型,以T-G为主,C-del G次之,T-del G最少。这3种单体型在对照组和病例组之间的差异比较都没有统计学意义。这提示OPN基因启动子SNP与湖北地区汉族居民2型糖尿病合并DN的易感性无关。