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目的皮肤表皮干细胞在皮肤稳态维持和伤口愈合中起重要作用。表皮干细胞是皮肤组织工程研制皮肤替代物的重要种子细胞。尚需建立促进表皮干细胞扩增的方法。寻找能促进表皮细胞增殖的化合物将有利于为皮肤组织的体外制备提供更多的种子细胞。槲皮素是一种植物雌激素,据报道可促进角质细胞增殖,迁移并加速皮肤伤口愈合。但是它对表皮干细胞增殖的影响尚不清楚。因此,探讨槲皮素是否能促进人表皮干细胞增殖并阐明其作用机制。方法我们从人体皮肤组织中分离、培养表皮干细胞,通过流式细胞分析、免疫荧光染色和免疫组织化学染色检测表皮干细胞标志分子(CK19、CD71、α6整合素和β1整合素)表达;通过BrdU掺入实验、MTT实验、Ki-67免疫荧光染色和增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色检测细胞增殖;通过流式细胞仪分析细胞周期;通过RT-PCR和免疫印迹检测β-catenin、c-Myc细胞周期蛋白表达。结果BrdU掺入试验表明槲皮素以时间和剂量依赖性方式促进人表皮干细胞的增殖。Ki-67免疫荧光染色证实了槲皮素对表皮干细胞的促增殖作用。细胞周期分析表明槲皮素处理表皮干细胞显著增加S期的细胞数量。机制研究表明,槲皮素显著上调β-catenin、c-Myc、细胞周期蛋白A2和E1的表达,这些细胞周期蛋白在G1期向S期转换中发挥重要作用。β-catenin抑制剂XAV-939和c-Myc抑制剂10058-F4均能显著抑制槲皮素诱导的表皮干细胞增殖。β-catenin抑制剂显著抑制槲皮素诱导的β-catenin、c-Myc、细胞周期蛋白A和E1表达。c-Myc抑制剂显著抑制槲皮素对c-Myc和细胞周期蛋白A2的上调。用雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182780预处理表皮干细胞,可抑制槲皮素诱导的细胞增殖以及β-catenin、c-Myc和周期蛋白A2的表达,而G蛋白偶联ER1的拮抗剂G15则没有上述作用。此外,通过免疫组织化学染色检测细胞增殖标记物PCNA和表皮干细胞标志分子(β1整合素和α6整合素),发现用槲皮素孵育皮肤组织显著增加表皮层厚度、以及表皮基底层PCNA、β1整合素和α6整合素阳性细胞数量。结论槲皮素通过ER介导上调β-catenin、c-Myc、细胞周期蛋白A2和E1表达,促进表皮干细胞增殖。槲皮素可用于扩增表皮干细胞,以制备自体表皮移植物和组织工程皮肤替代物。