【摘 要】
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目的:探讨牙周菌主要致病菌牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingiv alis）、具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum,F.nucleatum）、血链球菌（Streptoc occus sanguis,S.sanguis）联合灌胃对小鼠肠道菌群微生态及肠道黏膜屏障功能的影响。方法:将50只7周龄雄性C57BL/6小鼠测量完体重后随机分为
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目的:探讨牙周菌主要致病菌牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingiv alis）、具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum,F.nucleatum）、血链球菌（Streptoc occus sanguis,S.sanguis）联合灌胃对小鼠肠道菌群微生态及肠道黏膜屏障功能的影响。方法:将50只7周龄雄性C57BL/6小鼠测量完体重后随机分为5组:对照组（H）、F.nucleatum灌胃组（F）、P.gingivalis灌胃组（P）、S.sanguis灌胃组（S）、三菌种组（BF）;F组、P组、BF组分别灌胃100μl含1×109CFU的纯F.n菌悬液、纯P.g菌悬液以及三菌种（F.n+P.g+S.s）混悬液,S组灌胃100μl含1×108CFU的纯S.s菌悬液,H组则灌胃等量无菌PBS,1周2次,连续灌胃6周。于最后一次灌胃结束后再次测量小鼠体重,收集粪便,-80℃冰箱冻存;24h内以颈椎脱臼法处死小鼠并收集小鼠的结肠组织,-80℃冰箱冻存。将小鼠粪便样本行16S r DNA高通量测序分析肠道菌群,通过HE染色、Occludin免疫组化染色、q RT-PCR等对小鼠结肠黏膜屏障功能的改变、炎症因子的表达情况进行分析。结果:1、经细菌生化鉴定及扫描电镜观察P.g、F.n、S.s可以在体外建立三菌种生物膜模型。2、将P.g、F.n、S.s单细菌及三菌种联合（BF组）灌胃小鼠6周后发现,与H组相比,F组、P组、BF组肠道菌群α多样性降低,S组中肠道菌群α多样性升高,F组、P组、S组、BF组菌群组成均发生改变。其中F组、P组、BF组厚壁菌门相对丰度增加、拟杆菌门相对丰度降低（从门水平分析）,肠道菌群中炎症相关菌群Prevotella ceaeNK3B31、Enterorhabdus、脱硫弧菌属相对丰度升高,与健康相关菌群双歧杆菌属、Muribaculaceae、Parabacteroides相对丰度下降（从属水平上分析）;S组拟杆菌门相对丰度增加、放线菌门相对丰度减少（从门水平分析）,乳酸杆菌属、拟杆菌属丰度增加,双歧杆菌属、Aerococcus、Subdoligranulum相对丰度下降（从属水平上分析）。F组、P组、BF组结肠组织肠腔纹理及隐窝出现轻度变形,闭合蛋白（Occludin）表达降低以及结肠组织中炎症因子如肿瘤坏死因子-α（tumour necrosis factor-α,TNF-α）等表达升高,巨噬细胞M1型表面标志物一氧化氮合酶2（nitric oxide synthetase 2,NOS2）、B细胞表面标志物B220表达升高,其中P组较F组、BF组升高更为显著;S组变化与H组差异无统计学意义。结论:1、牙周主要致病菌P.g、F.n、S.s无论以单细菌、亦或三菌种联合形式灌胃均可改变小鼠肠道菌群多样性,但三菌种联合灌胃并未表现出较单细菌更大的影响作用;2、F.n或P.g单独以及P.g、F.n、S.s三菌种联合灌胃后,小鼠出现肠道黏膜屏障破坏。
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