论文部分内容阅读
甲基营养菌(Methylotrophic bacterium)WB-1能以甲胺磷农药作唯一碳、氮源生和,革晓氏染色阴性、单极生鞭毛、氧化酶反应阳性、不发酵肌醇.初步鉴定为气单胞菌(Aeromonas sp)WB-1.该菌在甲胺磷浓度为4,000ppm的无机盐培养基上培养16h后,生长量可达高峰,用此细胞催化该农药转化速率很快,在其代谢产物中未检出甲醇.随后,在酶水平,开展了WB-1菌降解甲胺磷主要酶类的研究:期间建立了一种检测非水溶性甲胺磷降解酶的新方法;筛选出了效果较好的去污剂Tween-20;确定了不同碳源对WB-1菌产酶的影响;采用超声波破细胞、缓冲液抽提、热处理(60℃,9min)、DEAE-纤维素<,32>和CM-纤维素<,32>柱层析等程序纯化,得到的酶制品比活力为18.4,收得率约78%,纯化倍数为22.8倍.将纯化的酶制品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳后,蛋白染色呈现一条主带,而酶活性染色则呈现一条与其迁移距离相同的谱带.该酶催化反应的适宜pH为9.0,底物专一性不强.在所试的金属离子中,Hg<2+>、Mn<2+>、Cu<2+>对酶抑制作用最强,而C o<2+>、Zn<2+>则影响不明显.该酶纯化后的稳定性较差,-20℃存放5天后,酶活性丧生60%以上.