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丹参酮ⅡA是中药丹参的主要活性成分之一，具有多种药理作用。之前的研究表明，丹参酮ⅡA静脉给药后在大鼠体内组织分布广泛，特别是在肺脏长期储留，可达12天。丹参酮ⅡA在肺部大量储留可能与其药效学有密切联系，但丹参酮ⅡA在肺脏储留的药代动力学机制并不清楚。本研究将在整体动物水平研究丹参酮ⅡA在大鼠肺脏的首过效应，然后在亚细胞水平研究丹参酮ⅡA在肺组织的细胞器分布，以解释在肺内储留的药代动力学机制。研究结果有助于了解丹参酮ⅡA的药代动力学特征，为下一步更好地开发和利用丹参酮ⅡA提供科学依据。
一、生物样品中丹参酮ⅡA检测的LC-MS/MS分析方法的验证。
建立并确证测定生物样品中丹参酮ⅡA浓度的灵敏、特异、可靠、线性范围广的LC-MS/MS分析方法。生物样品采用乙酸乙酯液-液萃取法进行抽提，内标为氯雷他定(Loratadine)。采用实验室已经建立的液相色谱-串联质谱的方法检测。每个样品的分析时间为2.5min。分析方法的定量下限为1.0ng/mL，各生物样品中丹参酮ⅡA的线性相关程度良好(r2均大于0.99)。以质控样品计算该分析方法的批内精密度RSD在0.60％～12.79％范围内，批间精密度RSD在1.05％～13.24％范围内；方法的准确度在85.46％～114.50％之间；方法的提取回收率在45.58％～57.48％之间。各项稳定性考察符合SFDA对生物样品测定方法的要求。该分析方法经验证结果满意，样品处理及检测过程简单、快速，可满足丹参酮ⅡA肺脏药代动力学研究的要求。
二、丹参酮ⅡA在大鼠体内的肺首过效应研究。
通过比较颈静脉注射与颈动脉注射两种给药途径下大鼠血浆中原型丹参酮ⅡA与结合型丹参酮ⅡA的各药动学参数，来考察丹参酮ⅡA在大鼠体内的肺首过效应。12只雄性SD大鼠分成两组(一只死亡，数据缺失)，分别经左颈动脉、右颈静脉给予丹参酮ⅡA6mg/kg。两组于给药前(0h)与给药后3、5、7、10、15、30、45min及1、1.5、2、3、4、6、8、12h从左颈动脉取血。采用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定血浆中丹参酮ⅡA的浓度，用非房室模型计算其药代动力学参数。结果显示，颈静脉给药组与颈动脉给药组大鼠的原型丹参酮ⅡA的AUC0→t存在统计学差异(P＜0.05)，分别为(241.27±46.90)ng·h/L及(371.73±66.78)ng·h/L，AUC0→∞也存在统计学差异(P＜0.05)。体内清除率CL在颈静脉及颈动脉给药组分别为(23.68±4.32)和(15.53±2.80)L/h/kg，组间有显著差异(P＜0.05)。颈动脉给药组的葡萄糖醛酸结合型丹参酮ⅡA的AUC0→∞为(1131.01±382.54)ng·h/L，稍大于颈静脉给药组的(1012.56±247.40)ng·h/L，P值大于0.05。大鼠肺脏对丹参酮ⅡA的首过清除率为35.59mL/min，远大于大鼠肝脏的血流量。肺脏对丹参酮ⅡA的固有清除率为肺血流量Q的53.85％，为45.71mL/min。丹参酮ⅡA在大鼠体内的肺首过效应为0.35。
三、丹参酮ⅡA在大鼠肝脏、肺脏内细胞器的分布。
考察给大鼠静脉注射丹参酮ⅡA后，丹参酮ⅡA在大鼠肺组织内细胞器的分布，并与其在肝脏中的细胞器分布比较，以解释丹参酮在肺脏内分布的药代动力学机制。大鼠经颈静脉给予丹参酮ⅡA6mg/kg，于给药后0.5、3、6、9、12、24、36、48h后分批处死，取其肝、肺组织，制成组织匀浆，采用差速离心法分离细胞器。采用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法测定组织和细胞器中丹参酮ⅡA的浓度。大鼠右颈静脉注射6mg/kg丹参酮ⅡA0.5h后，肺脏的原型丹参酮ⅡA浓度为(5454.71±1750.50)ng/g，远远高于肝脏中的(361.52±112.21)ng/g，约为肝脏中的15倍。给药后大多数时间点，不论是原型还是结合型，丹参酮ⅡA在肺脏的蓄积浓度远高于在肝脏的浓度。丹参酮ⅡA经颈静脉给药后，在肝脏和肝脏的各细胞器中，主要以结合型的形式存在，原型药物量较少。而在肺脏中则不同，原型丹参酮ⅡA比结合型稍多，但是浓度相差不大。丹参酮ⅡA在大鼠肝脏的微粒体和溶酶体部分分布较多，但是未发现明显的蓄积部位。而在肺脏的五种细胞器中，不论是原型还是结合型，各时间点丹参酮ⅡA在第3部分的相对蓄积率明显高于其他四部分，约为其他组的2～3倍。而且有多个时间点的原型和结合型丹参酮ⅡA的相对蓄积率在第3部分和其他细胞器的有统计学差异。表明丹参酮ⅡA在大鼠肺脏主要蓄积于轻线粒体部分。这可能与丹参酮的高脂溶性有关，也提示丹参酮ⅡA在大鼠肺脏的线粒体可能存在特异性的结合位点。
综上所述，丹参酮ⅡA在大鼠肺脏首过效应较强，为0.35；大鼠肺脏对丹参酮ⅡA的首过清除率较大，远大于大鼠肝脏的血流量。丹参酮ⅡA经颈静脉给药后，在肝脏中主要以结合型的形式存在；而在肺脏中原型和结合型丹参酮ⅡA浓度相差不大。在大鼠肝脏中，未发现丹参酮ⅡA有明显的蓄积部位。而在大鼠肺脏丹参酮ⅡA明显蓄积于轻线粒体部分，这可能与丹参酮ⅡA的高脂溶性有关。