【背景和目的】　　胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤，发病率高，治愈率低，严重危害着人类的健康。尽管目前在神经外科手术及放化疗等技术上有着快速发展，但胶质瘤的治疗仍面临着严峻的挑战。近年来，越来越多的证据显示微小RNA（microRNA，miRNA）在胶质瘤的治疗中发挥着重要作用。它可以通过降解靶基因的mRNA或者抑制mRNA翻译，在转录后水平对基因的表达进行调控。本课题旨在初步研究探讨miR-200b在神经胶质瘤细胞生长过程中的作用及其机制。　　【方法】本课题分为两个部分：　　第一部分为miR-200b在胶质瘤组织和细胞中的表达及对细胞生长的作用研究：　　⑴用qRT-PCR检测miR-200b在脑胶质瘤组织和细胞中的表达情况；　　⑵设计合成miR-200b模拟物（miR-200bM）和miR-200b抑制物（miR-200bI），用脂质体2000将miR-200bM和miR-200bI分别转染U87、U251、SF126、SF767细胞，用qRT-PCR法检测转染后各细胞中miR-200b的表达情况，应用MTT法和克隆形成实验观察miR-200b对胶质瘤细胞生长能力的影响。　　第二部分为miR-200b靶基因的确定及进一步功能研究：　　⑴生物信息学预测miR-200b的可能作用靶基因，qRT-PCR检测胶质瘤组织和细胞中候选靶基因的表达情况，qRT-PCR和Western blot分别检测转染miR-200bM细胞中靶基因mRNA和蛋白的表达情况；　　⑵运用 pMIR-REPORT荧光素酶报告基因载体，将其分别于β-gal表达质粒及miR-200b表达载体共转染U87细胞，检测报告基因活性；　　⑶构建CREB1过表达载体和CREB1敲除序列，并通过qRT-PCR和Western blot方法验证过表达和沉默效率。　　⑷采用MTT法和克隆形成实验观察过表达和敲除CREB1后对胶质瘤细胞生长能力的影响。　　【结果】　　⑴与正常组织相比，miR-200b在胶质瘤组织和细胞中表达明显下调；　　⑵miR-200b能明显抑制U87、U251、SF767细胞的生长能力，而抑制miR-200b却增加细胞的生长能力；　　⑶生物信息学预测miR-200b的可能作用靶基因为CREB1，其在胶质瘤组织和细胞中高表达。CREB1的3ˊUTR有在物种间保守的miR-200b作用位点，miR-200b能明显抑制作用点介导的荧光素酶活性，且miR-200b能抑制CREB1 mRNA和蛋白的表达，同时，miR-200b与CREB1的表达呈负相关；　　⑷下调 CREB1的表达能明显抑制 U87、U251、SF767细胞的生长能力，而上调CREB1的表达能明显增强 U87、U251、SF767细胞的生长能力。过表达 miR-200b的U87、U251、SF767细胞中无论是上调CREB1还是下调CREB1都表现出明显的生长抑制。　　【结论】　　⑴miR-200b能抑制神经胶质瘤细胞的生长；　　⑵miR-200b直接靶向调控CREB1的蛋白表达而抑制胶质瘤细胞生长的作用。