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目的:卵巢癌是妇科恶性肿瘤中病死率最高的一种。Pinin是分布于细胞间黏附结构-中间丝状体汇聚处细胞桥粒斑与装配与储存剪接因子的亚核区域-“核斑”中的多功能蛋白,在细胞内发挥多种作用,能调节细胞细胞间黏附,参与前体mRNA的可变剪接及mRNA转录后加工等。本研究旨在探索Pinin与转录共抑制因子CtBP(C-ternimal binding protein)在卵巢癌中的相互作用及Pinin在卵巢癌中的作用机制。 方法:通过免疫组织化学方法了解Pinin在正常卵巢组织及不同类型卵巢肿瘤组织中的表达情况。Western blot观察Pinin、CtBPs在正常细胞与人卵巢癌SKOV3细胞系中的表达。细胞免疫共沉淀、免疫荧光实验观察卵巢癌细胞中Pinin与CtBP的相互作用。选用人卵巢癌SKOV3细胞株,通过shRNA产生Pinin、CtBPs knockdown后卵巢癌细胞系(shPinin-1,shPinin-2,shPinin-3,shCtBP1,shCtBP2)以及对照组细胞系(shControl)。Western blot观察Pinin与CtBPs在gene knockdown细胞系中的表达情况及二者的相互作用。MTT法测定并比较不同gene knockdown卵巢癌细胞系的相对细胞生长率、相对细胞存活率及细胞在不同细胞外基质中的黏附力。软琼脂糖克隆形成实验比较Pinin knockdown前后卵巢癌细胞的克隆形成能力。MTT法比较不同gene knockdown卵巢癌细胞对抗肿瘤药物Taxol的反应。 结果:免疫组化实验显示Pinin在卵巢肿瘤中的表达率高于正常卵巢组织,在上皮性浆液性肿瘤中表达率最高。Western blot蛋白条带分析提示Pinin与CtBP2在卵巢癌细胞系中的表达高于正常卵巢细胞。在细胞免疫共沉淀实验中,利用抗CtBP2抗体将细胞蛋白中的CtBP2复合物“拖拽”出来;Western blot实验中,利用抗Pinin抗体,检测CtBP2复合物中的Pinin并出现清晰的蛋白条带,提示抗Pinin抗体与CtBP2复合物中的Pinin发生了特异性结合,表明卵巢癌细胞中Pinin与CtBP2之间存在相互作用。免疫荧光染色实验显示,被Alexa Fluor546染成绿色的Pinin与被Alexa Fluor647染料染成红色的CtBP2表达于细胞核内的相同区域。这进一步证实了卵巢癌中Pinin与CtBP2之间存在相互作用。Western blot观察不同gene knockdown细胞中Pinin、CtBPs蛋白表达,显示Pinin-shRNA1、2、3明显减弱卵巢癌细胞中Pinin的表达,Pinin-shRNA-1和Pinin-shRNA-2在减少Pinin蛋白表达上比Pinin-shRNA-3更高效;CtBP1、CtBP2gene knockdown后,卵巢癌细胞中Pinin表达下降;Pinin knockdown后,卵巢癌细胞中CtBP蛋白的表达减少,且CtBP1减少更明显,提示卵巢癌中Pinin与CtBPs能互相影响彼此的表达。相对细胞生长率实验结果显示:Pinin knockdown后,卵巢癌细胞相对生长率没有减小。但在细胞生长达到最大融合率后,细胞出现明显死亡,与对照组相比,存活细胞数量具有统计学差异(P≤0.005)。相对细胞存活率实验结果:对照组细胞生长达融合后,在相互挤压状态下细胞仍能继续存活,而Pinin knockdown后的卵巢癌细胞出现大量死亡。软琼脂糖克隆形成实验结果显示,与对照组相比,Pinin knockdown后卵巢癌细胞的集落形成能力明显下降(P<0.001)。细胞黏附实验中,与对照组相比,Pinin knockdown后卵巢癌细胞在不同细胞外基质中的黏附能力下降(P≤0.005)。研究Pinin knockdown卵巢癌细胞(shPinin-1,shPinin-2,shPinin-3)与其他gene knockdown卵巢癌细胞(shCtBP1和shCtBP2)及对照组(shControl)卵巢癌细胞对抗肿瘤药物Taxol的反应性发现,用量为0.1nM以上时,shPinin-1对Taxol的敏感性增强,这种反应敏感性的增加具有统计学意义(P<0.05),Taxol用量为0.1nM和100.0nM左右时,差异尤其显著(P<0.01)。 结论:Pinin在卵巢癌组织中高表达。卵巢癌中,Pinin的表达与CtBP2的表达具有一致性,二者之间存在相互作用。Pinin对卵巢癌细胞的增殖并无影响,但能调节卵巢癌细胞间黏附与细胞克隆形成,Pinin knockdown后卵巢癌细胞对Taxol的反应性增强。