Hey1慢病毒的构建及参与调控BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化

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目的:观察发状分裂相关增强子Heyl在骨形态发生蛋白9 (bone morphogenetic proteins 9, BMP9)诱导的小鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs) C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:包装慢病毒LV5-Heyl (过表达Heyl)口LV5-BMP9(过表达BMP9),并分别作用于C3H10T1/2田胞,RT-PCR和Western blot检测Hey1、BMP9的慢病毒是否包装成功;ELISA检测早期成骨指标碱性磷酸酶(ALP)的变化;晚期成骨指标钙盐沉积使用茜素红S染色检测;Heyl对BMP9调控的C3H10T1/2细胞增值的影响使用MTT技术检测;使用流式细胞术,用以检测被Heyl调控BMP诱导后的C3H10T1/2细胞周期的影响。结果:Hey1、BMP9的慢病毒包装成功;在成骨分化早期,过表达Hey1基因可促进BMP9调控的C3H10T1/2细胞的成骨分化与增殖;在成骨分化晚期,过表达Heyl基因可促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的成骨分化,并将BMP9调控的C3H10T1/2细胞的周期阻滞在G1期。结论:Heyl基因可参与调控BMP9诱导的小鼠C3H10T1/2细胞的早晚期成骨分化,并对细胞的增殖与周期有一定的影响。
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