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目的:血管钙化(vascular calcification,VC)是一种十分常见的血管病理类型,它和衰老,动脉粥样硬化性心脏病,糖尿病以及慢性肾脏病都有密切的联系,一旦出现,往往预示着比较差的临床结局。有证据表明,70岁以上的人群中超过90%的男性和超过67%的女性都存在血管钙化。对于女性来说,绝经后比绝经前更容易发生心血管疾病,而且这种趋势的增长与绝经后女性数量的增长是吻合的,所以这提示绝经期前女性的心血管系统可以从较高的内源性雌激素中获益。有实验结果表明,和卵巢切除的猪相比,普通雌性猪主动脉所分离出来的平滑肌细胞拥有更高的骨保护素水平,对抗钙化的能力也更强。USP22(ubiquitin-specific peptidase22)即泛素特异性蛋白酶,高度保守并且在人体组织广泛表达,最近的研究证明了USP22可以抑制SOX2的转录,并促进小鼠胚胎干细胞的分化,而分化是血管钙化中一个很重要的过程。同时,USP22可以增强雄激素受体介导的转录活性。所以,本实验旨在探究USP22与雌激素/雌激素受体(estrogen receptor,ER)之间的关系,以及USP22是否可以通过这种机制在血管钙化的过程中发挥作用。方法:通过高磷的诱导,利用人动脉血管平滑肌细胞建立血管钙化的细胞模型,并通过钙含量比色检测试剂盒对该模型进行评价;通过Western blotting观察钙化过程中USP22蛋白水平的变化情况;通过双荧光素酶报告试验检测USP22对于ER的转录调控作用;通过免疫共沉淀试验检测USP22与ER之间的相互作用;对人动脉血管平滑肌细胞进行过表达/沉默USP22之后再通过钙含量比色检测试剂盒检测钙化的改变。结果:成功建立以人动脉血管平滑肌细胞为基础的血管钙化细胞模型,钙含量比色检测试剂盒测定结果有明显升高;且在Western blotting中,随着钙化时间的延长RUNX2与USP22蛋白表达均有所升高;双荧光素酶报告结果显示USP22可以抑制ERα的转录活性;co-IP证实USP22与ERα之间确实可以结合;过表达USP22时,细胞钙化增强,RUNX2表达也升高,沉默USP22时,细胞钙化减弱,RUNX2表达也下降。结论:高磷条件可以诱导人动脉血管平滑肌细胞钙化;人动脉血管平滑肌细胞钙化时USP22表达升高,表明其可以促进钙化相关进程;结合双荧光素酶报告与co-IP结果,USP22可以通过与ERα直接结合的方式抑制其转录活性;而过表达/沉默USP22对钙化的影响可知,其确实促进钙化进程,并有是通过对ERα的作用继而促进钙化。