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目的探讨从脊柱手术出血分离骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells BMSCs)的可行性及BMSCs数与时间段和年龄的关系,为脊柱手术出血中BMSCs的提取再利用打下基础。方法术中无菌条件下用手锥钻开椎弓根,拔出手锥后立即吸取钉道里的出血,取0～5min时段的出血标本4例各5ml,采用percoll分离液密度梯度离心法分离血液标本,分离出每例标本中的单个核细胞(MNC),将获得的细胞分成4份用含10%的胎牛血清的低糖DMEM培养液体外爬片培养72小时全量换液除处悬浮细胞,以后每3d换液一次,爬片培养至铺满盖玻片约60%左右,用小鼠抗人CD14、CD29、CD34、CD44单克隆抗体进行免疫细胞化学法鉴定细胞;另15例分3时段:0～5min、5～10min、10～15min,抽取钉道中流出的血液,每时段各5ml,0～5min组记为A组、5～10min组记为B组、10～15min组记为C组。采用percoll分离液密度梯度离心法分离出每例标本中的MNC,获取的MNC分别滴加在6孔板中,培养3d后全量换液,PBS液冲洗除去未贴壁细胞、苏木素原位染色并计数每板孔贴壁细胞数。结果爬片培养的贴壁细胞免疫细胞化学法鉴定显示细胞膜抗原CD34、CD14表达阴性,CD44、CD29表达阳性。手术中A组的椎骨出血标本中的贴壁细胞数((?)±s)为262.47±172.20,B组的出血标本中的贴壁细胞数为1.93±3.63,C组出血标本中的贴壁细胞数为0.73±1.62。A组标本中的贴壁细胞数和B组及C组标本中的贴壁细胞数比较,差异有统计学意义(p＜0.01),而B组和C组的标本中的贴壁细胞数比较,差异没有统计学意义(p＞0.05)。A组椎骨出血标本中的贴壁细胞数与年龄呈负相关,相关系数为—0.921。结论1.密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离脊椎骨出血标本得到的贴壁单个核细胞不表达造血干细胞表面抗原,而表达BMSCs表面抗原,故获得的细胞为BMSCs;2.脊柱手术中0～5min时段标本能获得较多的细胞,可作为BMSCs获取来源;3.0～5min时段标本中的BMSCs数随年龄增长而减少。