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由21-30nt长度的小RNA介导RNA沉默是特异的基因调节机制,同时也是植物重要的抗病毒免疫机制。为了克服植物的免疫机制,病毒编码了多种RNA沉默抑制子。探明每种病毒沉默抑制子的生化性质和结构是了解其作用机制的的关键。本课题主要研究水稻条纹叶枯病毒(RSV)NS3、狐尾花叶纹病毒(FoMV)P26和黄金葛潜伏病毒(PoLV)P14沉默抑制子的生化性质和结构。我们重组表达纯化了这些蛋白,并做了结晶条件筛选,但没有获得晶体。同时我们探索了NS3蛋白的生化性质,我们的结果显示NS3蛋白是锌离子结合蛋白,能够形成稳定的同源二聚体。NS3识别长度约10bp的双链RNA。当双链RNA长度大于等于20bp时,出现多个蛋白结合位点。我们利用定点突变发现碱性氨基酸R50、K77、K112、R124G、K173、K174、R175、K196可能参与RNA结合的氨基酸。FoMV的P26蛋白由于自身聚合而无法获得晶体,PoLV的P14蛋白由于在沉淀剂存在的情况下发生沉淀而无法获得蛋白晶体。
另外,本论文还作了一个核糖体课题的工作。很多解旋酶参与真核生物核糖体合成的,可能重塑核糖体组装过程中的RNA/RNP结构。我们研究了酵母解旋酶Dbp8蛋白及相互作用蛋白Esf2的结构特征。我们表达纯化这两个蛋白,也筛选了结晶条件,但没有获得晶体。Pull-down结果还显示Dbp8与Esf2相互作用并不稳定,结果与文献报道不一致。