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目的：通过改进γ射线照射联合环磷酰胺、氯霉素腹腔注射法，构建较稳定再生障碍性贫血(aplasticanemia，简称：再障，AA)小鼠模型，并给予穿龙薯蓣皂苷干预，通过对小鼠外周血细胞的数量、骨髓有核细胞数量、骨髓增生情况等指标的检测，明确穿龙薯蓣皂苷对AA的治疗效果；通过对小鼠骨髓中HIF-1α、NF-κB、STAT3进行检测分析，观察HIF-1α/NF-κB通路在AA小鼠模型中的变化，探讨穿龙薯蓣皂苷在治疗AA模型小鼠过程中可能的作用机制，为临床治疗再生障碍性贫血提供相应的理论及动物实验基础。
方法：1.AA小鼠模型的建立及评估：采用γ射线照射联合环磷酰胺、氯霉素腹腔注射造模方法，将小鼠(n=90)于d1给予不同剂量的γ射线(3Gy、4Gy、5Gy)照射，d4、d5、d6给予不同剂量的环磷酰胺(25mg/(kg·d)、50mg/(kg·d))、等剂量的氯霉素(62.5mg/(kg·d))腹腔注射，制作6组不同剂量组合的AA小鼠模型。于d7、d14、d21、d28检测AA小鼠外周血细胞计数，骨髓有核细胞计数、骨髓病理切片等进行模型评价，确立稳定的AA小鼠模型。2.穿龙薯蓣皂苷对AA小鼠模型的药效学研究：建立AA小鼠模型(n=60),于d8天将AA模型小鼠再次随机分为模型组、穿龙薯蓣皂苷组、中药对照组(雷公藤多苷)、西药对照组(环孢菌素A)(n=15)，正常对照组(n=10)，各治疗组按给药剂量进行药物干预2周，检测各组外周血细胞计数、骨髓有核细胞计数、骨髓病理切片从而进行药效学评价。3.穿龙薯蓣皂苷通过HIF-1α/NF-κB通路治疗AA小鼠模型机制研究：采用qPCR、Westernblot方法检测骨髓中HIF-1α、NF-κB、STAT3mRNA、蛋白的表达水平，ELISA法检测外周血血清中IL-1β、TNF-α的表达水平，探讨穿龙薯蓣皂苷在治疗AA模型小鼠过程中可能的作用机制。
结果：1.AA模型的建立：与正常对照组相比较，各AA模型组在经137Csγ射线照射联合环磷酰胺、氯霉素腹腔注射后，外周血细胞三系均迅速减少，其中白细胞、血小板、网织红细胞减少较为显著(P＜0.01)，骨髓有核细胞数量明显下降(P＜0.05)，骨髓增生程度呈减低或重度减低，骨髓病理切片示造血细胞重度减少，脂肪细胞等非造血细胞增多，符合AA模型小鼠的病理特征，其中137Csγ射线(3Gy)照射联合环磷酰胺25mg/(kg·d)、氯霉素62.5mg/(kg·d)腹腔注射制备的AA小鼠模型更佳。2.穿龙薯蓣皂苷治疗AA模型小鼠的药效学研究：1)与模型组相比，各治疗组AA小鼠小鼠外周血白细胞均有不同程度上升，d15后穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组与模型组相比差异显著(P＜0.01，P＜0.05)；2)模型组及各治疗组AA小鼠外周血血红蛋白均呈现先下降后回升的趋势，于d15降至最低，与正常对照组相比差异显著(P＜0.01)，d19、d22穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组与模型组相比具有显著差异(P＜0.01)，雷公藤多苷组于d22与模型组相比存在差异(P＜0.01)，经各药物治疗后，d22穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组血红蛋白回升明显，但与正常对照组仍具有一定差异(P＜0.05)；3)各组AA小鼠外周血血小板于d7后出现不同程度的回升，各治疗组相对于模型组回升明显(P＜0.01)，穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组于d15大致恢复至正常水平；4)各治疗组股骨骨髓病理及胸骨骨髓涂片相较于模型组均显示骨髓增生情况明显活跃，股骨骨髓中有核细胞数量相较于模型组明显增加(P＜0.01)。3.穿龙薯蓣皂苷通过HIF-1α/NF-κB通路治疗AA小鼠的机制研究：1)与正常对照组相比，AA模型组小鼠骨髓中，HIF-1α、NF-kB、STAT3mRNA、蛋白的表达增强(P＜0.01，P＜0.05)。经各药物干预后，穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组AA小鼠骨髓中HIF-1α、NF-kBmRNA、蛋白表达水平与模型组相比下降明显(P＜0.01，P＜0.05)，其中NF-kBmRNA、蛋白的表达水平与正常对照组相比仍有差异(P＜0.05)，HIF-1αmRNA、蛋白的表达与正常对照组相比差异不大；AA小鼠经各组药物治疗后STAT3mRNA、蛋白表达相较于模型组均变化不明显。2)AA模型组小鼠外周血血清中IL-1β含量与正常对照组相比显著下降(P＜0.01)、TNF-α含量显著上升(P＜0.01)，经穿龙薯蓣皂苷、雷公藤多苷、环孢菌素A干预后，与模型组相比IL-1β的含量回升明显(P＜0.01，P＜0.05)；TNF-α的含量下降幅度明显(P＜0.05)。
结论：1.改良后的AA小鼠模型，符合再障基本病理特征，其中3Gy137Csγ射线联合25mg/(kg·d)环磷酰胺、62.5mg/(kg·d)氯霉素腹腔注射剂量组合成模率更高、死亡率更低。2.穿龙薯蓣皂苷能有效增加AA小鼠外周血细胞数量，增加AA小鼠骨髓中有核细胞数量，改善骨髓增生情况，促进骨髓造血。3.穿龙薯蓣皂苷改善AA小鼠骨髓造血可能的机制为：抑制AA小鼠骨髓内HIF-1α、NF-kB的表达，从而增加相关细胞因子IL-1β的分泌、减少TNF-α的释放，保护造血干细胞，促进骨髓造血功能的恢复，对AA小鼠产生积极的治疗作用。
方法：1.AA小鼠模型的建立及评估：采用γ射线照射联合环磷酰胺、氯霉素腹腔注射造模方法，将小鼠(n=90)于d1给予不同剂量的γ射线(3Gy、4Gy、5Gy)照射，d4、d5、d6给予不同剂量的环磷酰胺(25mg/(kg·d)、50mg/(kg·d))、等剂量的氯霉素(62.5mg/(kg·d))腹腔注射，制作6组不同剂量组合的AA小鼠模型。于d7、d14、d21、d28检测AA小鼠外周血细胞计数，骨髓有核细胞计数、骨髓病理切片等进行模型评价，确立稳定的AA小鼠模型。2.穿龙薯蓣皂苷对AA小鼠模型的药效学研究：建立AA小鼠模型(n=60),于d8天将AA模型小鼠再次随机分为模型组、穿龙薯蓣皂苷组、中药对照组(雷公藤多苷)、西药对照组(环孢菌素A)(n=15)，正常对照组(n=10)，各治疗组按给药剂量进行药物干预2周，检测各组外周血细胞计数、骨髓有核细胞计数、骨髓病理切片从而进行药效学评价。3.穿龙薯蓣皂苷通过HIF-1α/NF-κB通路治疗AA小鼠模型机制研究：采用qPCR、Westernblot方法检测骨髓中HIF-1α、NF-κB、STAT3mRNA、蛋白的表达水平，ELISA法检测外周血血清中IL-1β、TNF-α的表达水平，探讨穿龙薯蓣皂苷在治疗AA模型小鼠过程中可能的作用机制。
结果：1.AA模型的建立：与正常对照组相比较，各AA模型组在经137Csγ射线照射联合环磷酰胺、氯霉素腹腔注射后，外周血细胞三系均迅速减少，其中白细胞、血小板、网织红细胞减少较为显著(P＜0.01)，骨髓有核细胞数量明显下降(P＜0.05)，骨髓增生程度呈减低或重度减低，骨髓病理切片示造血细胞重度减少，脂肪细胞等非造血细胞增多，符合AA模型小鼠的病理特征，其中137Csγ射线(3Gy)照射联合环磷酰胺25mg/(kg·d)、氯霉素62.5mg/(kg·d)腹腔注射制备的AA小鼠模型更佳。2.穿龙薯蓣皂苷治疗AA模型小鼠的药效学研究：1)与模型组相比，各治疗组AA小鼠小鼠外周血白细胞均有不同程度上升，d15后穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组与模型组相比差异显著(P＜0.01，P＜0.05)；2)模型组及各治疗组AA小鼠外周血血红蛋白均呈现先下降后回升的趋势，于d15降至最低，与正常对照组相比差异显著(P＜0.01)，d19、d22穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组与模型组相比具有显著差异(P＜0.01)，雷公藤多苷组于d22与模型组相比存在差异(P＜0.01)，经各药物治疗后，d22穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组血红蛋白回升明显，但与正常对照组仍具有一定差异(P＜0.05)；3)各组AA小鼠外周血血小板于d7后出现不同程度的回升，各治疗组相对于模型组回升明显(P＜0.01)，穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组于d15大致恢复至正常水平；4)各治疗组股骨骨髓病理及胸骨骨髓涂片相较于模型组均显示骨髓增生情况明显活跃，股骨骨髓中有核细胞数量相较于模型组明显增加(P＜0.01)。3.穿龙薯蓣皂苷通过HIF-1α/NF-κB通路治疗AA小鼠的机制研究：1)与正常对照组相比，AA模型组小鼠骨髓中，HIF-1α、NF-kB、STAT3mRNA、蛋白的表达增强(P＜0.01，P＜0.05)。经各药物干预后，穿龙薯蓣皂苷组、环孢菌素A组AA小鼠骨髓中HIF-1α、NF-kBmRNA、蛋白表达水平与模型组相比下降明显(P＜0.01，P＜0.05)，其中NF-kBmRNA、蛋白的表达水平与正常对照组相比仍有差异(P＜0.05)，HIF-1αmRNA、蛋白的表达与正常对照组相比差异不大；AA小鼠经各组药物治疗后STAT3mRNA、蛋白表达相较于模型组均变化不明显。2)AA模型组小鼠外周血血清中IL-1β含量与正常对照组相比显著下降(P＜0.01)、TNF-α含量显著上升(P＜0.01)，经穿龙薯蓣皂苷、雷公藤多苷、环孢菌素A干预后，与模型组相比IL-1β的含量回升明显(P＜0.01，P＜0.05)；TNF-α的含量下降幅度明显(P＜0.05)。
结论：1.改良后的AA小鼠模型，符合再障基本病理特征，其中3Gy137Csγ射线联合25mg/(kg·d)环磷酰胺、62.5mg/(kg·d)氯霉素腹腔注射剂量组合成模率更高、死亡率更低。2.穿龙薯蓣皂苷能有效增加AA小鼠外周血细胞数量，增加AA小鼠骨髓中有核细胞数量，改善骨髓增生情况，促进骨髓造血。3.穿龙薯蓣皂苷改善AA小鼠骨髓造血可能的机制为：抑制AA小鼠骨髓内HIF-1α、NF-kB的表达，从而增加相关细胞因子IL-1β的分泌、减少TNF-α的释放，保护造血干细胞，促进骨髓造血功能的恢复，对AA小鼠产生积极的治疗作用。