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研究背景及目的胆囊癌在消化道恶性肿瘤中发病率排名第6位,其预后极差,死亡率接近发病率。胆囊癌早期缺乏特异性临床表现,如今根治性手术切除是唯一的治愈手段,但术后易出现复发转移。基因突变在肿瘤发生过程中发挥着重要作用,而对于肿瘤驱动基因的研究不仅揭示肿瘤发生的原因,更重要的是可以以此为切入点,探索治疗方式。环指蛋白43(Ring finger protein 43,RNF43)作为Wnt信号转导通路的抑制因子,在个体发育、细胞增殖分化等方便发挥重要调控作用。RNF43在胆囊癌中存在较高的突变频率,与胆囊癌的发生具有密切关系,值得进一步研究。方法1.通过TOPflash/FOPflash双荧光素酶报告基因系统实验及qPCR检测Wnt通路下游靶基因转录变化,明确RNF43对Wnt通路的抑制作用,确定Y332*点突变对RNF43功能的影响。2.体外细胞学实验探究RNF43及其突变体Y332*对胆囊癌细胞增殖、侵袭能力的影响。3.结合蛋白交联、串联亲和纯化及串联质谱,确定RNF43的相互作用蛋白,并通过CO-IP验证RNF43点突变Y332*对蛋白互作的影响。4.通过Real-Time qPCR检测40例胆囊癌患者癌与癌旁组织中RNF43表达情况,并与患者预后及临床病理信息进行综合分析,探究RNF43的功能变化与胆囊癌发生发展及预后转归的关系。结果1.RNF43在胆囊癌细胞中对Wnt信号通路具有抑制作用;2.RNF43截短突变Y332*对Wnt信号通路的抑制作用部分缺失,可能和其DVL结合结构域缺失有关;3.体外细胞学实验发现,RNF43及点突变Y332*对胆囊癌细胞系的增殖迁移功能没有明显影响;4.发现RNF43能与蛋白PRMT5相互作用,而Y332*突变可削弱二者的结合能力;5.通过胆囊癌mRNA差异表达检测发现RNF43表达在癌与癌旁组织中差异不显著;6.RNF43的表达水平与胆囊癌的发展及患者的预后无明显相关性。结论虽然本研究结果未见RNF43与胆囊癌的发展具有相关性,但仍不能排除RNF43的功能缺失在胆囊上皮恶变过程中的作用。