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近年来,手足口病(HFMD)在我国呈持续性流行态势,而且死亡病例逐年增加。肠道病毒71型(EV71)感染所引起的HFMD患者易导致严重的并发症,如无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹等神经系统相关疾病,还可能引起更严重的肺水肿,伴有肺水肿的重症病例病情进展快,死亡率高。目前,EV71致病的分子机制尚不清楚,而且没有针对这种病毒的特异性药物及疫苗。本研究从体液免疫角度探索EV71抗体反应的有关规律,以期为EV71流行病的致病机理、治疗及疫苗研发提供一些理论参考。本项研究有两方面的内容：其一,通过临床血清样本研究及实验动物水平的验证,探讨EV71与脊髓灰质炎病毒(PV)之间的抗体交叉反应性；其二,通过酶联免疫吸附试验ELISA实验及中和抑制实验研究SP70和SP55在EV71感染的人体内能否诱导产生相应的中和抗体。ELISA检测EV71或PV与健康儿童血清IgG的反应性,研究发现EV71与PV阳性EV71阴性健康儿童血清IgG有很高的反应性(阳性率达77.8%),而且在这些PV阳性EV71阴性儿童血清中针对这两种病毒的IgG在含量上呈正相关(r=0.58)。微量中和试验研究发现,这些PV阳性儿童血清不能中和EV71。EV71与PV阳性但EV71阴性人血清孵育后感染人单核白血病细胞系(THP-1),感染后培养24小时,以实时定量PCR检测进入THP-1的EV71病毒数量,结果发现PV阳性EV71阴性的儿童血清能增强EV71感染进入THP-1细胞。以上结果初步表明,PV疫苗接种能诱导产生与EV71交叉反应性的抗体,虽然这些交叉反应性抗体是非中和抗体,但这些非中和抗体在体外能促进EV71感染THP-1,这表明PV接种产生的与EV71交叉反应性抗体可能与EV71的致病有关,所以本研究可能为EV71致病机制的研究开辟一个可能的新方向。为了在背景清晰的实验动物水平进一步验证EV71与PV之间的抗体交叉反应性,以原核表达与亲和纯化等方法分别获得EV71和PV的衣壳蛋白VP1及非结构蛋白3C,将PV-VP1、EV71-VP1、EV71灭活疫苗及PV灭活疫苗(IPV)分别经皮下免疫BALB/c小鼠制得免疫血清。蛋白免疫印迹实验显示PV-VP1能与EV71-VP1抗血清反应,反之,EV71-VP1也能与PV-VP1抗血清反应；竞争ELISA试验进一步显示EV71-VP1蛋白能明显抑制PV-VP1与其特异性免疫血清抗体的结合,反之亦然；但微量中和实验揭示PV阳性小鼠血清不能中和EV71。SPF级小鼠实验研究证实EV71与PV之间确实存在大量交叉反应性非中和抗体。前人以小鼠实验研究发现两个EV71的重要线性中和表位(SP70与SP55)。为了研究这两个表位在人体内的反应性,合成这两个表位,收集EV71感染儿童恢复期血清及未曾感染EV71的健康儿童血清,以ELISA检测SP70或SP55与EV71感染患者恢复期血清IgG的反应性。研究发现,SP70或SP55与EV71感染者血清IgG的反应性和与未曾感染的健康儿童血清IgG的反应性没有差异。EV71阳性儿童血清分别与SP70或SP55预孵育后在体外中和EV71,研究发现这两个肽不能抑制EV71阳性人血清的中和效应。本研究表明,在自然感染时,SP70和SP55在人体内不能诱导产生相应的中和抗体,故SP70和SP55不能用于EV71多肽疫苗的研发。