【摘 要】
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目的探究糖尿病肾病（Diabetic Kidney Disease,DKD）模型中KRAS及下游通路和代谢重编程的改变。方法分别在高葡萄糖或低葡萄糖环境中对肾小管上皮细胞（HK-2）进行培养构建DKD体外模型,利用Western blot检测DKD模型中KRAS及下游蛋白、关键代谢酶、线粒体复合体蛋白和线粒体动力学等蛋白表达水平。利用流式细胞术和Oroboros2k-Oxygraph呼吸检测系统（
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目的探究糖尿病肾病（Diabetic Kidney Disease,DKD）模型中KRAS及下游通路和代谢重编程的改变。方法分别在高葡萄糖或低葡萄糖环境中对肾小管上皮细胞（HK-2）进行培养构建DKD体外模型,利用Western blot检测DKD模型中KRAS及下游蛋白、关键代谢酶、线粒体复合体蛋白和线粒体动力学等蛋白表达水平。利用流式细胞术和Oroboros2k-Oxygraph呼吸检测系统（O2K）检测线粒体电子传递链的活性。使用VION-IMS-QTOF质谱仪对细胞样本进行脂质组学分析。利用BTBR背景下的瘦素基因（ob）缺乏小鼠,构建DKD体内模型,动态监测小鼠血糖水平直至20周龄处死,收集血液样本进行脂质组学分析,利用Western blot检测肾脏组织中纤连蛋白、KRAS及下游蛋白的表达水平。结果1成功构建DKD体外和体内模型。2 DKD体外模型中发生代谢重编程:包括有氧糖酵解增强,糖代谢旁路发生激活,与对照组相比,DKD体外模型中HK2、G6PD和AKR1B1等关键酶表达增高,ENO1和GAPDH表达降低（P＜0.05）;线粒体功能发生障碍,与对照组相比,DKD体外模型中线粒体复合体Ⅰ活性降低、SOD2等蛋白水平降低,同时线粒体活性氧积累,线粒体膜电位降低（P＜0.05）;脂质代谢异常,在不同葡萄糖浓度刺激细胞样本之间发现了23个差异代谢物以及5条代谢途径。3 DKD体外模型中KRAS及下游蛋白表达水平改变（P＜0.05）,发现模型中RAS-RAF-MEK-ERK信号通路可能发生激活,而RAS-p38 MAPK和RAS-AKT信号通路发生抑制。4 DKD体内模型脂质代谢异常,从两组小鼠血浆样本之间鉴定出20种差异代谢物和2条代谢途径。5 DKD体内模型中KRAS表达降低,下游p-ERK1/2表达增加（P＜0.05）。结论高糖环境下HK-2细胞和BTBR背景下的ob/ob自发性DKD小鼠模型的KRAS及下游通路和代谢重编程发生改变。图 12 幅;表 3 个;参 127 篇。
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