【摘 要】
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目的研究过表达破骨细胞刺激性跨膜蛋白（Osteoclast stimulatory transmembrane protein,OC-STAMP）驱动肺泡上皮II型细胞（alveolar type II epithelial cells,AT2）MLE-12细胞衰老的机制。方法使用HOPE-MED8050动式染尘构建大鼠矽肺模型,并予以4-苯基丁酸（4-Phenylbutyric,4-PBA）治疗
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目的研究过表达破骨细胞刺激性跨膜蛋白（Osteoclast stimulatory transmembrane protein,OC-STAMP）驱动肺泡上皮II型细胞（alveolar type II epithelial cells,AT2）MLE-12细胞衰老的机制。方法使用HOPE-MED8050动式染尘构建大鼠矽肺模型,并予以4-苯基丁酸（4-Phenylbutyric,4-PBA）治疗处理。体外培养MLE-12,分别给予Ocstamp过表达质粒、Si O2、4-PBA等试剂处理。免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测大鼠肺内OC-STAMP表达,免疫印迹法检测大鼠肺内细胞衰老相关蛋白表达情况。免疫荧光染色法和免疫印迹法检测细胞衰老相关蛋白、上皮间质转化（Epithelial mesenchymal transformation,EMT）相关蛋白和内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ER stress）相关蛋白表达水平。β-半乳糖苷酶染色（β-galactosidase staining,β-gal）检测细胞衰老情况。免疫共沉淀法检测OC-STAMP与人非肌肉肌球蛋白重链IIA（myosin heavy chain 9,MYH9）是否具有相互作用。结果1在矽肺模型大鼠正常肺泡区域、巨噬细胞肺泡炎区域和细胞纤维性矽结节区域,ABCA3阳性细胞百分比在巨噬细胞肺泡炎区域中显著上调（P＜0.05）;与正常肺泡区域相比较,巨噬细胞肺泡炎区域和细胞纤维性矽结节区域VG染色面积百分比、PCNA和p21阳性细胞百分比逐渐上调（P＜0.05）;在巨噬细胞肺泡炎区域,巨噬细胞PCNA阳性百分比显著高于AT2细胞,而AT2细胞p21阳性细胞百分比显著高于巨噬细胞（P＜0.05）。2与对照组相比较,OC-STAMP蛋白水平和m RNA表达水平在矽肺大鼠肺内上调（P＜0.05）,免疫荧光染色结果显示OC-STAMP可定位于AT2。与矽肺模型组相比较,4-PBA治疗组细胞衰老、ER stress相关蛋白表达下调（P＜0.05）。3过表达Ocstamp的MLE-12发生EMT,β-gal染色阳性,EMT、细胞衰老、ER stress相关信号蛋白表达水平上调（P＜0.05）;予以si RNA-Ocstamp或4-PBA能逆转上述效应（P＜0.05）。4免疫共沉淀结果显示MYH9与OC-STAMP能够结合,予以si RNA-Myh9细胞衰老相关蛋白表达水平下调（P＜0.05）。结论过表达Ocstamp驱动MLE-12细胞EMT、ER stress及细胞衰老。图28幅;表25个;参134篇
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