目的:探讨携带乙醛脱氢酶2(Aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)rs671单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的个体ALDH2基因在m RNA水平的改变及ALDH2 m RNA在胃癌细胞中发生可变剪接的情况。方法:(1)收集贵州医科大学附属医院体检人群(年龄在20-40岁,男女各24例)的外周抗凝全血;设计可特异性扩增含ALDH2 rs671SNP位点的引物进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增;提取外周全血白细胞(WBC)DNA为模板,PCR产物纯化后进行Sanger测序鉴定受试者的ALDH2 rs671SNP。(2)以受试者WBC互补脱氧核糖核酸(complementary DNA,c DNA)为模板,设计可特异性扩增含ALDH2 rs671c(ALDH2 rs671SNP位点对应的m RNA位点,c:c DNA)位点的引物进行PCR扩增;PCR产物纯化后进行Sanger测序鉴定受试者的ALDH2 rs671c位点的序列。(3)对基因型表现为ALDH2 rs671(AA)的受试者的逆转录-PCR(Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)产物进行TA克隆测序,明确c DNA在ALDH2 rs671c位点表现为“A”的比例。(4)用胃癌细胞AGS的总RNA进行c DNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of c DNA ends,RACE)检测ALDH2 m RNA的转录起始位点。(5)设计ALDH2基因特异性引物,用胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN45)、正常人胃粘膜上皮细胞GES-1和WBC的RT产物进行PCR扩增,然后对ALDH2m RNA进行可变剪接分析。(6)使用BLAST工具进行核苷酸序列比对分析。(7)使用DNAStar软件分析ALDH2变异体1(Vatiant1,V1)的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)。结果:(1)48例受试者中ALDH2 rs671(GG、GA、AA)三种基因型的基因频率分别是58.3%、39.6%、2.1%,并且c DNA在ALDH2 rs671c位点的测序结果一致,都表现为“G”。(2)基因型表现为ALDH2 rs671(AA)的受试者在ALDH2 rs671c位点约85.7%(6/7)表现为“G”,约14.3%(1/7)表现为“A”。(3)通过5’RACE检测出ALDH2 m RNA在胃癌细胞AGS中存在13个新的转录起始位点。(4)从5’RACE产物中发现V1外显子2的3’端发生可变剪接。(5)V1外显子1的3’端和外显子3的5’端三个不同的位点发生可变剪接。(6)V1外显子2的3’端和外显子4的5’端也发生可变剪接。(7)V1的内含子1保留了一个外显子,长度为116个核苷酸。(8)生物信息学分析V1含有8个长度超过100个氨基酸的ORF。结论:(1)在我们研究的48例受试者中,基因型表现为ALDH2 rs671(AA)的个体,ALDH2 m RNA可能发生(A→I)RNA编辑;19例基因型表现为ALDH2 rs671(GA)的个体,c DNA的ALDH2 rs671c位点都表现为“G”。(2)ALDH2 m RNA在胃癌细胞AGS中存在13个新的转录起始位点,并且在胃癌细胞(AGS、HGC-27、MKN45)、WBC中存在6种新的可变剪接形式,提示其存在复杂的表达调控及功能。