WRKY基因家族存在于植物基因组内,是植物中最大的转录因子家族之一,因具有保守的WRKY结构域而得到此命名。WRKY基因家族参与植物的多个生理生化反应,其中包括植物的生长发育、非生物的胁迫以及免疫应答反应等过程。研究表明,拟南芥WRKY33在MAPK3/6介导植保素camalexin的合成以及活性氧的爆发中起到举足轻重的作用,这说明WRKY33在植物抗病反应中起着积极调控的作用。但是WRKY33的研究主要集中在模式植物中,在植物蛋白和食用油的主要来源的大豆中的研究还非常匮乏。我们前期研究表明沉默大豆WRKY33同源基因GmWRKY33会减弱GmMPK6的激活及增加感病性,说明GmWRKY33s在大豆抗病反应中起着重要作用。在此,我们拟通过功能获得性实验,从另一个角度去证明GmWRKY33s在防御反应中的作用。通过生物信息学分析,我们发现6个与拟南芥AtWRKY33享有较高同源性的大豆Gm WRKY33同源基因。不同的植物中WRKY33的N端均有一个十分保守的、4-6个SP(丝氨酸、脯氨酸)位点的SP簇群区。SP中的S是可被MAPK3/6磷酸化的靶位点。为了研究磷酸化位点的重要功能,我们逐级将6个GmWRKY33s中磷酸化位点S突变成D,模拟持续磷酸化的状态;另一方面,我们还逐级将S突变成A,从而去除磷酸化位点。目前为止,我们已经获得了各级模拟磷酸化突变体32个,以及各级去除磷酸化位点突变体18个;且已将所有这些突变型以及野生型Gm WRKY33s全部克隆至双元过表达终端载体;获得部分过表达Gm WRKY33s突变体转基因株系进行了抗病性鉴定。初步实验表明,过表达其中之一模拟磷酸化的GmWRKY33(Gm09g2802004D)会增强马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)的抗病性,从而证实了大豆GmWRKY33s在抗病中起到重要的作用。因此,我们预测Gm WRKY33s能提高大豆对病原菌的抗病性。在对过表达所有野生型、持续模拟磷酸化以及去除磷酸化Gm WRKY33的转基因株系进行多种抗病性鉴定后,我们便可知道GmWRKY33的磷酸化位点对其功能的重要性。这将是我们今后研究的重点之一。